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目的:本实验主要探讨银杏叶提取物(EGb)的治疗疗程与发育期癫痫大鼠学习记忆能力的之间的关系,并进一步探讨EGb疗效与海马突触重塑的关系。
方法:21日龄SD大鼠随机分为生理盐水组(NS组)、PTZ点燃模型组,以戊四氮进行点燃模型的建立;模型建立后,模型组随机分为:点燃对照7天组(P7组)、点燃对照14天组(P14组)、EGb治疗7天组(E7组)、EGb治疗14天组(E14组)。E7组和E14组给予300mg/kg的EGb治疗7天和14天,在EGb治疗前后分别用Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力;采用免疫组化检测大鼠海马突触素(P38)及突触后致密物质(PSD95)阳性细胞数的数量及分布,用Western blot方法测大鼠海马P38及PSD95蛋白表达变化,采用电镜观察各组大鼠海马神经CA3区超微结构的变化。
结果:(1)EGb治疗前,21日龄大鼠,戊四氮(PTZ)点燃各组大鼠与NS组相比,达到学会标准所需的电击次数增多(P<0.05),PTZ点燃各组之间没有统计学差异(P>0.05)。EGb治疗后,P7组和P14组达到学会标准的次数较治疗前没有统计学差异(P>0.05),而E7组与E14组大鼠达到学会标准的次数均少于治疗前(P<0.05),但是E7组与E14组比较,达到学会标准的次数随EGb治疗时间的增加并无明显变化,且无统计学差异(P>0.05)。
(2)Western-blot中P38蛋白表达及定量分析结果:与NS组比较,各点燃对照组(P7组与P14组)大鼠海马P38的蛋白表达减少(P<0.05),E7组和E14组蛋白表达量较点燃对照组大鼠海马P38蛋白表达量增加(P<0.05)。P38免疫组化结果:21日龄SD大鼠海马区P7与P14组的P38免疫反应产物表达量较NS组减少(P<0.05),E7组及E14组较P7与P14组增加(P<0.05),且E7组和E14组之间有统计学差异(P<0.05)。
(3)Western-blot中PSD95蛋白表达及定量分析结果:与NS组比较,各点燃对照组(P7组与P14组)大鼠海马PSD95的蛋白表达减少(P<0.05),E7组和E14组蛋白表达量较P7组与P14组大鼠海马PSD95蛋白表达量增加(P<0.05)。PSD95免疫组化结果:21日龄SD大鼠海马区P7与P14组的PSD95免疫反应产物表达量较NS组减少(P<0.05);E7组及E14组较P7组与P14组增加(P<0.05),且E7组及E14组之间有统计学差异(P<0.05)。
(4)电镜超微结构:NS组的海马CA3区神经元形态及突触结构未见明显异常;P7组及P14组大鼠细胞及突触结构有损害;E7组、E14组较P7组及P14组有所改善,致密物较前稍增厚,仍未恢复至正常状态。
结论:PTZ点燃发育期癫痫大鼠学习记忆能力下降,且超微结结构有所损害;而EGb治疗可以改善癫痫大鼠的认知水平,并上调P38及PSD95的表达,改善突触超微结构,推测突触重塑可能参与了EGb改善认知的过程。