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溶瘤型单纯疱疹病毒(Oncolytic herpes simplex virus type,OHSV)已证明在肿瘤治疗中有效,并被批准用于治疗黑色素瘤。基因UL54编码的早期即刻蛋白(Immediate-early(IE)protein)HSV感染的必须基因。UL54转录修饰可增加oHSV的肿瘤靶向性。ICP27含512氨基酸,翻译后经磷酸化和精氨酸甲基化,活性增强。ICP27在丝氨酸激酶诱导区被丝氨酸/苏氨酸激酶、cAMP依赖性蛋白激酶A、钙调素依赖性蛋白激酶I/II、丝裂原和应激激活蛋白激酶和周期蛋白依赖性激酶3磷酸化。然而,UL54基因转录调控序列和转录因子尚未见报道。发现和改造UL54基因转录调控有重要意义,将为研究新型溶瘤病毒抗癌药物提供实验依据。目的:发现和改造单纯疱疹病毒UL54基因(ICP27)转录调控序列,为溶瘤I型单纯疱疹病毒用于宫颈癌的溶瘤病毒治疗奠定基础。方法:1.分离提取HSV病毒并测序鉴定;2.guidRNA设计合成;3.载体构建;4.UL54基因转录调控序列分析;结果:本文分离鉴定了一株中国人的HSV-1毒株,将其命名为HSV-1-LXMW。UL54基因上游DNA序列测定和进化分析发现HSV-1-LXMW与美国HSV-1毒株Patton和H129亲缘性近。用预测软件,我们发现在HSV-1-LXMW中UL54转录调控序列与转录因子Oct-1、v-Myb和Pax-6结合,而在HSV-2株中它们只与Oct-1和Hairy结合。通过多序列对比分析的进一步验证表明,HSV的UL54基因上游DNA序列含17个保守区,且HSV-1和HSV-2与Oct-1具有共同的结合序列,但它们分别具有结合v-Myb和Pax-6或Hairy的独特序列。文献检索结果表明,转录因子的表达与HSV-1和HSV-2的组织嗜性一致。这些发现增加了对HSV生物学和溶瘤病毒治疗中转录调控的新理解。同时,本文设计了UL54转录调控序列改造的溶瘤HSV,并构建了质粒,为下一步宫颈癌溶瘤HSV的构建奠定了基础。结论:1.分离和鉴定了一个中国人的HSV新毒株,命名为HSV-1-LXMW,发现其和美国HSV-1毒株Patton和H129亲缘性近。2.首次发现HSV的UL54基因潜在的转录调控序列与转录因子Oct-1、v-Myb,Pax-6和Hairy,并预测其决定组织亲嗜性。3.用我们自己分离的中国人HSV毒株,国际首次设计了独特的UL54转录调控序列改造的溶瘤HSV,并构建了质粒,为下一步宫颈癌溶瘤HSV的构建和专利申请奠定了基础。