论文部分内容阅读
目的:在前期实验研究中我们建立了RSV急性感染打破OVA口服耐受的小鼠模型,研究发现RSV急性感染能够打破OVA口服耐受使原本对OVA耐受的小鼠在雾化吸入OVA后肺部炎症显著加重,且CCL20在肺组织中表达增加,CCR6阳性的炎症细胞浸润明显增多。本研究将进一步研究CCL20-CCR6在RSV急性感染打破OVA口服耐受使肺部炎症加重的机制。方法:(1)在体外使用O、1、5、10 MOI的RSV感染(小鼠肺上皮细胞MLE-12系)MLE-12细胞,分别在6h、12h、24h三个不同时间点收集细胞样品,提取RNA,使用real time-PCR检测CCL20的mRNA表达水平;提取蛋白样品,应用免疫印迹法检测产生CCL20的信号通路中相关的蛋白表达,如:STAT3、IKKα及NF-κB。(2)在原有的RSV急性感染OVA口服耐受小鼠模型基础上给予腹腔注射CCL20中和抗体,以腹腔注射isotype IgG1抗体作为对照组,利用ELISA检测血清IgE,HE染色检测肺组织病理,RT-qPCR检测肺部炎症因子表达,肺泡灌洗液瑞氏染色检测炎症细胞,并用流式细胞术检测肺门淋巴结淋巴细胞类型,观察阻断CCL20-CCR6轴对RSV急性感染OVA口服耐受小鼠的影响。结果:(1)与control组比较,RSV感染MLE-12细胞后CCL20的mRNA的水平明显升高,且在12小时CCL20 mRNA的水平最高。选择12小时作为时间点比较不同MOI的RSV感染对MLE-12细胞CCL20 mRNA的水平的影响。发现在MOI=5时CCL20 mRNA的水平最高;随着时间的推移CCL20 mRNA水平随之降低。(2)与control组相比,在12小时以不同的MOI(1,5,10)的RSV感染MLE-12细胞,发现与调控CCL20表达的信号通路相关分子MyD88水平升高,STAT3、IKKα、NF-κB磷酸化水平升高;(3)在动物实验中,应用中和CCL20抗体阻断后,肺泡灌洗液中淋巴细胞明显减少,细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞均呈下降的趋势;血清IgE降低,肺组织炎症细胞浸润及气道上皮增生脱落明显改善;肺组织炎症因子IL-5、IL-13、Il-7A表达降低;肺门淋巴结CCR6+T淋巴细胞及CCR6+IL-17+细胞减少。结论:(1)RSV感染能够使上皮细胞CCL20表达增加,其机制可能是通过激活调控CCL20表达通路中的一些信号通路分子如:MyD88、STAT3、IKKα、NF-κB(2)阻断CCL20-CCR6轴能够减轻RSV急性感染OVA口服耐受小鼠的肺部炎症。