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流苏(Chionanthus retusus)是木樨科(Oleaceae)流苏树属(Chionanthus)植物,国家二级珍稀植物,落叶灌木或乔木,集食用、药用、观赏和经济价值于一身。其耐盐、耐旱、耐寒,对复杂的南北方气候具有较强的适应能力。目前流苏传统繁殖方式主要以播种繁殖为主,生产周期较长,发芽率较低,为推进流苏无性系快速发展,进行以下研究。本试验首先以流苏幼胚为外植体,通过开展流苏体细胞胚发生的相关研究,筛选出了较为合适的培养基与培养条件,培养出了流苏体细胞胚再生植株;其次通过测定流苏体细胞胚不同发育阶段主要生理生化指标进一步揭示其生理机理;最后以茎段为外植体,确定了茎段快速繁殖技术的培养基及不同激素配比。研究结果如下:1、流苏幼胚体细胞胚发生(1)流苏幼胚体细胞胚诱导最适培养基:WPM+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D,体细胞胚诱导率可达12.36%。(2)最适诱导流苏体细胞胚萌发成苗培养基:MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3,萌发率可达41.3%,成苗率为29.82%。(3)通过设置不同暗培养时间0 d,30 d,60 d,90 d进行体细胞胚诱导试验,结果表明90 d内完全暗培养效果最佳,其体胚诱导率可达11.18%。(4)通过比较幼胚子叶,幼嫩叶片、成熟胚下胚轴及成熟胚子叶对体细胞胚诱导的效果,发现幼胚子叶为最适流苏体细胞胚诱导外植体,体胚诱导率可以达到11.20%。(5)在整个流苏幼胚体细胞胚发生过程中,可溶性糖含量呈现“上升-下降-上升”的趋势,可溶性蛋白含量和POD酶活性均呈现“上升-下降”的趋势;SOD酶活性呈现“上升-下降-上升”的趋势。2、流苏成熟种胚萌发成苗:(1)外植体最佳消毒方式为:75%酒精消毒30 s,无菌水冲洗3-4次,后用0.1%Hgcl2溶液消毒5 min,用无菌水冲洗4-5次。(2)成熟种胚最佳萌发成苗培养基:WPM+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L TDZ,萌发率可达91.02%,成苗率可达86.5%。(3)通过比较沙藏0 d、90 d、100 d、110 d、120 d的成熟种胚萌发率及成苗率,当沙藏110 d的种胚生长4 d后,胚芽达到1.1 cm,28 d后生长高度能够达到4.95cm,因此沙藏110 d的成熟种胚最有利于其萌发成苗。3、流苏茎段再生体系的建立(1)流苏最适茎段分化培养基为:WPM+0.5 mg/L KT+1.5 mg/L 6-BA时,茎段高度可达2.89 cm,新展叶片为5.67片,繁殖系数3.13;(2)随着GA3浓度的增加其茎段的伸长高度呈现先增高后降低的趋势。当GA3浓度为2.0 mg/L时,培养至20 d统计时,茎段伸长3.01cm,生长高度为5.01cm。(3)茎段最适生根培养基为:WPM+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA。单独添加IBA或NAA都不能诱导根原基的发生,生根率为62.15%。