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乳腺癌是我国女性第一位高发的恶性肿瘤,每年新增患者逐年增多,且有呈逐渐年轻化的趋势。尽管早期乳腺癌筛查的开展和综合治疗水平的提高改善了治疗效果,仍有30%的乳腺癌患者出现晚期复发和转移,严重威胁女性生命健康安全。随着对乳腺癌等肿瘤的不断深入研究,人们逐渐认识到“MicroRNA”在肿瘤发生中的作用,多种类的miRNA才是肿瘤基因遗传程序调控的基础,能调控多种肿瘤细胞的恶性行为。针对miRNA与乳腺癌在内的多种肿瘤相关性研究则显示与患者病理资料和预后关系密切。其中,miRNA-204与乳腺癌的关系正是本研究的重点。探明miRNA在乳腺癌发生和发展中的影响和作用方式,对于乳腺癌的预防和治疗有重要意义。而明确miRNA-204在乳腺癌患者中表达意义及影响方式,有助于寻找乳腺癌早期诊断的标记物和精准治疗的分子靶点,同时能为乳腺癌新治疗方案的制定提供依据。第一部分Micro RNA-204表达与乳腺癌临床病理资料的关系研究目的明确miR-204表达水平与乳腺癌患者临床病理资料的相关性方法利用RT-qPCR法检测miR-204在乳腺癌病理组织中的表达情况,结合病理资料分析miR-204与临床病理床资料的相关性。结果1、miR-204在正常乳腺组织和癌变组织中均有表达,且在乳腺癌组织中的表达明显低于正常乳腺组织(P<0.05)。2、miR-204水平与患者年龄、肿瘤直径、ER、RP及HER2表达强度均无明显相关性;而miR-204水平随着病理组织组织学分级的增高而明显降低;随着临床分期的增高而明显降低,且淋巴转移的病理组织中miR-204水平明显低于未发生淋巴转移的组织(P<0.05)。第二部分Micro RNA-204对乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响目的明确miR-204对乳腺癌MCF-7细胞株增殖、侵袭及凋亡等行为的影响。方法利用脂质体转染miR-204 mimics至MCF-7细胞过表达miR-204,利用MTT法检测MCF-7细胞增殖情况;利用Hoechst染色法检测细胞凋亡水平;利用流式细胞术检测细胞周期情况,及Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力变化。结果1、外源转染miR-204 mimics至MCF7细胞显著提高miR-204水平,且与miR-NC组比较,过表达miR-204能明显抑制MCF7细胞活力。2、Hoechst 33342结果显示,与miR-NC组比较,miR-204 mimics组细胞凋亡数明显增高;Annexin V/PI检测结果也显示miR-204 mimics组细胞凋亡率明显高于miR-NC组。3、过表达miR-204能诱导乳腺癌MCF7细胞G2/M细胞周期阻滞4、与miR-NC组细胞比较转染miR-204 minics的MCF7细胞穿膜数量明显减少。5、与miR-NC组比较,MCF7细胞转染miR-204 minics过表达miR-204后侵袭能力明显降低。第三部分Micro RNA204过表达对乳腺癌PI3K/AKT信号通路的影响目的探讨miR-204影响MCF-7细胞生物学行为及乳腺癌发生发展的机制。方法比较PTEN在乳腺癌细胞和人乳腺细胞中的表达差异;利用Target Scan靶基因预测软件筛选出PTEN为miR-204的调控靶基因;检测miR-204对PTEN表达的影响进行验证;过表达MCF-7细胞中miR-204分析对PTEN mRNA和蛋白表达水平的影响;并检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白活性变化。结果1、PTEN在MCF-7细胞中的表达水平低于Hs 841.T细胞;2、Target Scan靶基因预测报告显示miR-204与PTEN序列中存在互补片段,提示PTEN是miR-204潜在调控的下游靶基因;3、MCF-7细胞中过表达miR-204能提高PTEN mRNA和蛋白表达水平;4、过表达MCF-7细胞中miR-204能明显抑制PI3K/AKT通路相关蛋白活性。结论:1、miR-204在乳腺癌组织中低表达,且与乳腺癌临床资料有相关性;2、过表达miR-204能影响乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭等生物学行为;3、miR-204靶向调控PTEN抑制PI3K/AKT信号通路抑制乳腺癌的发生发展。