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关于甘蔗宿根矮化病(Ratoon stunting disease, RSD)的分离培养、多克隆抗体的制备和检测已进行相关的研究,但有关甘蔗宿根矮化病病原菌(Leifsonia xyli subsp. xyli, Lxx)中推测为抗oK因子(anti-sigma K factor, RskA)的膜蛋白(membrane protein, MP) Lxx18460基因单克隆抗体的制备、检测及遗传转化的研究在国内外尚未见报道。本研究在本课题组前期工作的基础上,进一步分析对该基因的特异性进行分析,诱导并纯化了去跨膜区域的Lχx18460基因可读框349-717序列(385 bp)编码的蛋白为抗原,通过多次免疫纯种BALB/C小鼠,获得其单克隆抗体；用该单克隆抗体对细菌总蛋白和感病、健康甘蔗样品总蛋白进行检测。构建了该基因的植物表达载体并转入野生型烟草,检测得到烟草转基因植株。本研究结果有助于探讨抗aK因子基因的功能及其在Lxx中的作用。主要结果如下：1、将含有Lx.x18460基因的pET-30a质粒的菌液,利用IPTG(浓度0.1 mM)诱导蛋白表达,收集诱导表达后的菌液于50 mL的离心管中,放在经4℃预冷的冷冻离心机内,4℃条件下,5000 rpm,离心20mmin,弃尽上清。并用两种不同的蛋白纯化方法对该蛋白进行纯化并比较分析,经SDS-PAGE分析鉴定结果表明,两种方法均可以纯化出目的蛋白,用改进的方法纯化出的蛋白更纯,量更多,并进一步透析和浓缩,用紫外分光光度法检测获得的浓缩后蛋白质量浓度,用来做免疫抗原。2、以诱导表达的蛋白为抗原,通过多次免疫纯种BALB/C小鼠,获得了单克隆抗体。ELISA检测结果表明,其效价大于1：512000。Western blot检测结果表明,该基因在细菌中和感病甘蔗样品中表达,在健康甘蔗样品中几乎不表达。3、本研究中通过构建了Lxx18460基因的植株表达载体,构建完成后并进行了相应验证,表明载体可以用于下一步转化。进一步转化烟草获得转基因植株。对转基因植株进行了表型观察,与对照相比,转入Lxx18460基因的烟草植株,表现出明显的矮化症状,可见该基因在一定程度上抑制了烟草的生长。