铁皮石斛两步培养法及有效成分积累的研究

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铁皮石斛(Dendrobium off icinale Kimura et M igo)又称铁皮兰,隶属于兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium),多年生附生型草本植物,新鲜或干燥茎入药,其药效成分主要为多糖(Polysaccharide)和生物碱(Alkaloid)等。铁皮石斛种子单独栽种发芽率相当低,与真菌类共生才能发芽。所以用栽种普通植物的传统方法种植石斛类的种子很难保证生长量。加之铁皮石斛多生长于阴湿环境中,自然生长和人工栽培十分缓慢,收获产量低,供不应求。近年来人们开展了大量有关铁皮石斛组织培养的研究,成功进行了铁皮石斛分化诱导和快速繁殖。然而,试管苗虽然繁殖系数高、生长快,但往往有效成分含量低,且植物体内有较高植物生长调节剂残留,影响用药安全。组织培养能加快繁殖和促进试管苗生长,使生物产量快速增加;腐殖质土栽培能促进有效成分合成。本实验将组织培养繁殖系数高、生长快的优势与土壤栽培利于有效成分合成、用药安全优势相结合,建立一种铁皮石斛的阶段式培养和栽培模式,结果如下:1.以微扦插的方式接种组培苗,其效果优于传统组织培养。生长激素和细胞分裂素组合下效果较好的为1/2MS+0.5mg/L NAA+1.Omg/L6-BA,芽茎生长旺盛,颜色呈绿色,有光泽。在培养条件下,培养40d,茎段茎节处长出侧芽,平均生物量增长4.52g/株。在铁皮石斛组培苗壮苗生根的过程中,1/2MS+0.5mg/LNAA+1.5mg/L6-BA的组合对铁皮石斛组培苗壮苗生根最有利,组培苗生长旺盛,健壮整齐,颜色深绿。比传统的组织培养时间短,同时又达到了组培快繁生产试管苗的目的。2.铁皮石斛组织培养过程中适宜PH值为5.6,温度控制在25±1℃最合适,此温度下组培苗生长情况最佳,但试管苗栽培时温度在15-28℃,这样有利于有效成分的累积;铁皮石斛的生长对光照的要求较严,组培过程光照控制在1400Lx左右,光照时间12h/d,此光照下组培苗生长良好,铁皮石斛试管苗壮苗生根时光照控制在3000Lx左右,光照时间12h/d,在此光照下芽苗生长旺盛,颜色呈深绿,根健壮整齐。3.实验室模仿适宜铁皮石斛试管苗生长的温度、光照强度和光照时间。夜间温度在15--18℃,白天温度25--28℃,适合铁皮石斛次生代谢产物的积累。光照在7500Lx、光照时间12h/d条件下铁皮石斛生长旺盛,苗呈深绿色。每月喷洒一次含有大量元素的营养液,以1/3倍的标准液最佳,喷洒前调营养液PH值为5.6。4.组织培养能加快繁殖和促进试管苗生长,使生物产量快速增加;腐殖质土栽培能促进有效成分合成。将组织培养与腐殖质土壤栽培技术相结合,建立了铁皮石斛的阶段式培养和栽培模式。通过进一步优化铁皮石斛的阶段式培养和栽培模式,将有利于提高铁皮石斛药材生产效益。
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