【摘 要】
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山葡萄果皮富含花色苷,其颜色的变化主要取决于花色苷的构成及含量。本试验以不同成熟期的山葡萄的果皮为实验材料,采用高通量测序技术进行转录组分析;找到花色苷合成关键基
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山葡萄果皮富含花色苷,其颜色的变化主要取决于花色苷的构成及含量。本试验以不同成熟期的山葡萄的果皮为实验材料,采用高通量测序技术进行转录组分析;找到花色苷合成关键基因VamPAL,并克隆了其全长序列,进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR技术对山葡萄果皮成熟的8个时期的基因表达进行了分析。主要研究结果如下:以山葡萄转色前、着色50%和完熟期的果皮为试验材料,进行转录组测序分析,结果显示:山葡萄转色前与50%着色期的全部差异表达基因的数目是2986个,GO注释的差异表达基因数量为2632个,COG功能注释为1982个,参与苯丙烷生物合成途径的DEGs数量是14个,参与类黄酮生物合成途径DEGs数量是14个;山葡萄转色前与完熟时期的全部差异表达基因的数目是3841个,GO注释的差异表达基因数量为3390个,COG功能注释为2532个,参与苯丙烷生物合成途径的DEGs数量是27个,参与类黄酮生物合成途径DEGs数量是14个。并且在两个不同对比时期中,共同注释到5个PAL基因。本试验结果明确了山葡萄果皮在转色过程中相关基因的变化,为进一步大量挖掘山葡萄果皮成熟过程中重要表达基因建立一定的基础。通过PCR技术,从山葡萄果皮里克隆VamPAL基因全长序列。序列分析显示,具有完整的ORF,VamPAL基因全长1764bp,编码557个氨基酸,属于苯丙氨酸解氨酶超基因家族,该基因编码的蛋白不具有信号肽,不含有跨膜结构域,整体表现为亲水性,是稳定的亲水蛋白,进化树的分析显示同欧亚种葡萄同源性最高。以山葡萄成熟过程中的8个时期果皮为试验材料,采用实时荧光定量PCR技术,分析了VamPAL基因的表达模式。结果显示,VamPAL基因在8个果实成熟时期中表达量具有一定规律性,从花后四周到完熟期表达量总体呈递增趋势,50%着色与100%着色期,VamPAL基因表达量极低,此结论与转录组测序结果一致。
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