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华北八宝[Hylotelephium tatarinowii(Maxim.)H.Ohba],又称华北景天,是景天科八宝属的多年生草本植物,属于我国的名贵香草植物。
八宝属(Hylotelephium)中大部分植物都具有祛风清热、活血化瘀、解毒消肿的功效,且目前对于八宝属药用植物的成分分析多集中于黄酮类物质。
由于华北八宝属于高海拔地区植物,目前可利用的野生资源较少,因此为扩大种源,可以采用组织培养的方法对其进行大量快速繁殖,而对于华北八宝的组织培养研究目前还未见报道。
本论文以华北八宝的幼嫩叶片作为外植体,探讨了不同的植物生长调节剂及不同浓度的配比对愈伤组织、不定芽分化以及生根的诱导效应,建立了华北八宝的组织培养再生体系。采用紫外分光光度法及高效液相色谱法对培养出的愈伤组织和再生苗进行黄酮类化合物的分析与测定。本研究为华北八宝的进一步开发与利用提供了理论依据。
主要研究结果如下:
1.以华北八宝幼嫩叶片为外植体,分别接种于附加不同浓度的2,4-D、NAA、6-BA、KT的培养基上,研究不同植物生长调节剂对愈伤组织的诱导效应。其中,2,4-D和6-BA均可以诱导产生愈伤组织,MS+2,4-D2.0 mg/L培养基中的诱导率可达到23.81%;加入较高浓度的2,4-D,则会抑制愈伤组织的产生,当2,4-D浓度达到4.0 mg/L时,无愈伤组织产生。在含有2,4-D与6-BA组合的培养基中,愈伤组织诱导率均有明显上升。培养基MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L愈伤组织诱导率最高,达到92.06%,并且愈伤组织状态良好,黄绿色较疏松,生长旺盛。
2.以诱导出的愈伤组织为材料,分别接种于附加不同浓度的6-BA、TDZ、NAA的培养基上,进行不定芽的诱导。在有不同浓度的TDZ、TDZ与6-BA组合或TDZ与NAA组合的芽诱导培养基中,均未有不定芽的分化。但在含有不同浓度的6-BA或6-BA与NAA组合的芽诱导培养基中,均有不定芽的分化,其中MS+6-BA1.0 mg/L培养基不定芽分化率最高,达到81.52%。
3.在MS+6-BA1.0 mg/L培养基中长到6-8 cm的植株,有花蕾形成,并能正常开花,有开花植株的瓶数可以占到总瓶数的62.5%。
4.将3-4 cm高的不定芽接于不含任何生长调节剂的MS和1/2MS生根培养基中,两种生根培养基中生根率均可达到100%,而1/2MS培养基中的每个植株的平均根条数可达到5.9条,高于MS培养基中的平均根条数(4.0条)。在MS培养基中加入不同浓度IBA后,不定芽的生根率均有所下降,平均根条数也低于未加IBA的两种培养基,诱导出的不定根柔嫩且细长。将再生植株进行移栽,移栽成活率可达到95%。
5.以MS+2,4-D1.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L和MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L培养基中增殖的愈伤组织、再生苗、野生华北八宝植株为材料,分别对它们进行黄酮类化合物的提取。用紫外分光光度法测定总黄酮含量,四种材料中总黄酮的含量分别为0.943%、0.935%、1.510%、1.488%。即再生苗与野生植株中的总黄酮含量较高,并且再生苗中总黄酮含量高于野生植株;两种培养基中培养出的愈伤组织中的总黄酮含量低于野生植株。用高效液相色谱法对其进行芦丁含量的测定,芦丁含量分别为0.364 mg/g、0.206 mg/g、1.193 mg/g、1.793mg/g。野生植株中的芦丁含量显著高于其它三种培养物中的芦丁含量;在三种培养材料中,再生苗的芦丁含量相对较高。