硬刺松潘裸鲤亚种与种的线粒体基因组、遗传多样性及其繁殖生物学的初步研究

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硬刺松潘裸鲤(Gymnocypris potaninif firmispinatus)为松潘裸鲤(G. potanini)指名亚种,均隶属于鲤形目、鲤科、裂腹鱼亚科、裸鲤属,为我国特有种。2014年2月至2015年9月,在雅砻江一级支流安宁河和岷江上游分别采集到1244尾硬刺松潘裸鲤和13尾松潘裸鲤样品,对2个物种的线粒体基因组(mtDNA)和遗传多样性进行了分析,并初步研究了硬刺松潘裸鲤的繁殖生物学特征。主要研究结果如下:1.硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤mtDNA序列全长分别为16680bp和16749bp,呈环状,与已报道的裸鲤属鱼类相似。与已公布的大多数鱼类mtDNA的组成与排列类似,硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤mtDNA包括13个蛋白质编码基因,22个tRNA基因,两个rRNA基因和一个D-loop控制区。硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤1ntDNA分别编码3790个和3800个氨基酸。除col起始密码子为GTG外,其它基因起始密码子均以ATG; coII, nd4和cytb以T为终止密码子,其它各基因都均是以TAA或TAG为终止密码子。硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤mtDNA包括22个tRNA基因和2个rRNA基因。tRNA基因序列大小为68-76bp,呈典型的四叶式二级结构,除松潘裸鲤tRNA-Phe比硬刺松潘裸鲤多1对GC碱基外,其它的tRNA二级结构均完全相同。它们的rrnL基因大小均为1681bp,rrnL都在tRNA-Val和tRNA-LeuUUR之间;rrnS基因大小分别为957bp和958bp,在tRNA-Phe和tRNA-Val.之间。基于线粒体DNA氨基酸序列构建的ME、ML、NJ和UPGMA4种进化树分析表明,裸鲤属鱼类系统发育关系较近,硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤聚为一支,有较近的亲缘关系。2.基于cytb、col基因和D-loop控制区的遗传结构及多样性分析表明,安宁河5个硬刺松潘裸鲤群体和岷江2个松潘裸鲤群体基因A+T的平均含量均高于C+G含量,表现出明显的反G偏倚。cytb、coI基因和D-loop控制区变异位点分别有43个、28个和18个,变异位点转换率均大于颠换率。所有群体中cytb、coI基因和D-loop控制区分别发现21个、13个和6个单倍型,cytb基因单倍型数量最多。基于cytb和coI的序列分析表明,硬刺松潘裸鲤单倍型多样性和核苷酸多样性指数均高于松潘裸鲤,而基于D-loop控制区序列的单倍型多样性和核苷酸多样指数性则呈相反趋势。遗传距离分析表明,硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤间的遗传距离大于各种内群体间遗传距离,但小于裸鲤属种间的遗传距离。同时,基于cytb、col基因和D-loop控制区系统发育关系分析表明,硬刺松潘裸鲤和松潘裸鲤系统发育关系较近,均能为硬刺松潘裸鲤是松潘裸鲤的亚种提供了证据。3.安宁河硬刺松潘裸鲤样品体长范围为3.6cm~18.8cm (7.86±1.52cm),全长(Total length, TL)与体重(Bodv weight, BW)呈显著幂函数相关,关系式为:BW=0.0025TL3.3943(n=1244):全长与日龄(Daily age,D)呈线性相关,关系式为TL=0.7574+0.03184D(n=280);体重与日龄呈线性相关,关系式为BW=-0.03901+5.4383D(n=280)。对7尾硬刺松潘裸鲤Ⅳ期卵巢统计分析表明,其绝对繁殖力为1224粒~1656粒(1467.77±121.88粒),相对繁殖力为29.66粒/g~44.35粒/g(33.06±9.11粒/g)。对2014年2月和4月性腺进行组织切片,结果表明硬刺松潘裸鲤为卵巢Ⅲ期,Ⅰ期、Ⅱ期卵母细胞仍占有一定的比例;Ⅳ期卵巢,也存在Ⅲ期卵母细胞,由此推测其繁殖方式为分批同步产卵。硬刺松潘裸鲤受精卵淡黄色、沉性、微粘性,卵径为(3.01±0.24)mm。在水温(12.4+0.7)℃的孵化条件下,胚胎期历经卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、胚孔封闭期、器官形成期、出膜前期7个时期,历时269.5h。初孵仔鱼全长(8.41±0.24)mm。出膜后第15天(14.9±0.86℃)和18天(12.1士0.18℃)卵黄吸收完全。12.1±0.18℃培养条件下,硬刺松潘裸鲤仔鱼卵黄吸收完全,背鳍、臀鳍和尾鳍的叉形分别出现于出膜后27天、40天和62天;经过113天的培育,仔鱼基本具备成鱼的形态特征。轮纹统计结果表明,硬刺松潘裸鲤耳石幼鱼轮纹沉积具有日周期性,即每日形成一轮日轮,结合野外样品采集时间、微耳石日轮数据和石轮纹沉积规律推算,2月、4月和9月采集的硬刺松潘裸鲤幼鱼的孵化期分别为4月~9月、5月~12月,12月~次年4月,高峰期分别为2月、6月~7月和9月~11月,由此还可以看出硬刺松潘裸鲤为多次产卵。
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