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目的:使用小干扰RNA(siRNA)沉默人牙周膜细胞(HPDLCs)中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的基因;观察在LPS刺激下,TRAF6基因沉默对HPDLCs增殖能力和成骨分化能力的影响。方法:(1)酶消化联合组织块法体外培养HPDLCs,并进行免疫细胞化学鉴定。(2)实验分组:TRAF6 siRNA组、Control SiRNA组、转染试剂组、空白对照组,脂质体法将TRAF6 siRNA、control siRNA分别转染入对应组HPDLCs中,转染试剂组仅加入等量的转染试剂,空白对照组不做任何处理,再使用10μg/ml LPS刺激HPDLCs,RTPCR、Western blot检测细胞中TRAF6的mRNA及蛋白的表达情况。(3)CCK-8法检测TRAF6 siRNA组、Control SiRNA组、转染试剂组在转染后使用含或不含10μg/ml LPS的培养基培养24h、48h时细胞增殖情况。(4)使用10μg/ml LPS+成骨分化诱导培养基培养转染细胞3d,碱性磷酸酶检测试剂盒检测ALP的活性,RT-PCR检测Runx-2和I型胶原蛋白(Col-I)基因表达情况。结果:(1)免疫细胞化学实验结果显示HPDLCs培养成功;(2)TRAF6 siRNA组的TRAF6 mRNA和蛋白的表达水平与其余三组相比显著下降,差异有统计学意义(p<0.001),表明TRAF6基因沉默的细胞模型构建成功;(3)CCK-8法检测结果显示,10μg/ml LPS刺激各组细胞24、48h时,LPS刺激下Control SiRNA组、转染试剂组的A值要高于对照组,差异有统计学意义(p<0.001),表明LPS刺激能促进HPDLCs增殖;LPS刺激24h时TRAF6 siRNA组在LPS刺激下A值与未受LPS刺激组无差异,LPS刺激48h时TRAF6siRNA组的A值在LPS刺激组低于未受LPS刺激组,表明TRAF6基因沉默能抑制LPS引起的HPDLCs增殖;(4)10μg/ml LPS+成骨分化诱导培养基培养细胞3d后,TRAF6 siRNA组的ALP表达量要高于空白对照、转染试剂组和control siRNA组,差异有统计学意义(p<0.05);TRAF6 siRNA组的Runx-2和Col-I的mRNA表达均明显高于其余三组,差异有统计学意义(p<0.05),表明TRAF6基因沉默能提高LPS刺激下HPDLCs的成骨能力。结论:TRAF6基因沉默能抑制LPS刺激下HPDLCs的增殖,促进LPS刺激下HPDLCs的成骨分化,推测TRAF6可能是牙周病潜在的治疗靶点。