“三热论”复方为“国医大师”周仲瑛先生临床治疗糖尿病的基础方,由地骨皮、鬼箭羽、黄连、山茱萸四味药组成。该方运用独特的“三热”理论辩证组方,即以地骨皮清“燥热”,黄连清“湿热”,鬼箭羽祛“瘀热”,山茱萸治阴虚,临床疗效显著。这四味药在防治糖尿病及其并发症方面的研究报道也颇多。本文旨在研究“三热论”复方对糖尿病血管并发症的有效部位和活性成分,建立有效部位的质量标准,为“三热论”复方临床治疗糖尿病及其并发症提供实验基础。本文分四部分对“三热论”复方有效部位和活性成分进行研究:第一部分:“三热论”方提取物治疗糖尿病血管并发症的药效学比较首先制备了全方的水提物和醇提物,然后采用高脂饲料复合链脲佐菌素建立小鼠糖尿病模型,分别给糖尿病小鼠灌胃“三热论”方水提物和醇提物,通过测定糖尿病小鼠的空腹血糖(FBG)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN),比较水提物和醇提物治疗糖尿病血管并发症的药效,发现醇提物各项指标测定结果明显优于水提物,综合以上结果,确定以70%乙醇回流提取“三热论”复方。第二部分:“三热论”方有效部位的纯化工艺研究采用大孔树脂分离法纯化富集“三热论”方中的有效成分。首先,以吸附性能为指标筛选不同类型的大孔树脂,确定HPD400大孔树脂纯化复方效果好。然后,采用HPD400大孔树脂纯化“三热论”方醇提物,分别以蒸馏水、10%乙醇、30%乙醇、60%乙醇和90%乙醇为洗脱溶剂,用UV和HPLC分析各洗脱部位中的有效成分,合并有效成分高的洗脱部位。结果确定了“三热论”方的有效部位为合并收集的10%-30%-60%-90%乙醇洗脱部位。第三部分:“三热论”方有效部位成分分析及指纹图谱研究首先,用UV测定“三热论”方有效部位中有效成分,总含量达到80.3%;HPLC测定有效部位中各指标成分,各指标成分总量达到23.75%;并建立“三热论”方有效部位的指纹图谱,21个共有峰指认了其中8个峰的成分,为“三热论”方有效部位的质量控制提供了一个全面、多指标的方法。第四部分:“三热论”方有效部位治疗糖尿病血管并发症的药效研究考察了“三热论”方有效部位对糖尿病小鼠FBG、NO、NOS、SCr、BUN、丙二醛(MDA)、糖化血清蛋白(GSP)的影响,发现“三热论”方有效部位有显著的降糖作用,可以有效调节糖尿病模型小鼠上述生化指标。以上结果表明“三热论”方具有治疗糖尿病及其血管并发症的作用。