论文部分内容阅读
二膦酸盐（Bisphosphonates，Bps）是一类焦磷酸的类似物，临床上广泛应用于骨相关疾病，包括骨质疏松、佩吉特病以及恶性肿瘤的骨转移。但随着二膦酸盐的广泛使用，越来越多的文献提示，二膦酸盐治疗可以引起颌骨骨坏死（Bisphophonates-RelatedOsteonecrosisoftheJaws,BRONJ）。尽管学者们对BRONJ进行了大量的临床及基础研究，但其发病机制仍不明确，也缺乏行之有效的临床治疗方法。本研究首先在大型动物-小型猪上建立二膦酸盐相关颌骨骨坏死动物模型，观察其生理病理变化，探讨可能的发病机理，然后利用异基因骨髓间充质干细胞（AllogeneicBoneMarrowMesenchymalStemCell,BMMSCs)移植治疗BRONJ，尝试为临床提供有效的治疗方法。第一部分小型猪二膦酸盐相关颌骨骨坏死动物模型的建立研究目的：建立小型猪二膦酸盐相关颌骨骨坏死的动物模型，为进一步研究BRONJ的发病机理及探讨有效的临床治疗方法奠定基础。研究方法：8只小型猪接受静脉滴注唑来膦酸盐（择泰），每两周一次，每次4mg，共滴注10次。在用药后拔除下颌第一前磨牙。通过定期的临床局部观察，CT检查及组织病理学方法诊断下颌BRONJ的发生。研究结果：拔牙后4周，临床检查发现用药动物拔牙窝未愈合，拔牙后8周，实验动物口内可见死骨暴露，并且持续到接受治疗后。CT及组织病理学均证实了骨坏死的发生。结论：静脉滴注唑来膦酸盐+拔牙可以诱导小型猪发生BRONJ，建立的动物模型是有效可靠的，可用于BRONJ的发病机理及治疗的进一步研究。第二部分BRONJ小型猪的骨髓间充质干细胞功能及免疫功能受到影响研究目的：研究二膦酸盐对小型猪骨髓间充质干细胞功能及免疫功能的影响，以期探讨BRONJ的发病机理。研究方法：分离并培养使用唑来膦酸盐的小型猪骨髓间充质干细胞，研究其增殖、凋亡、免疫调节及多向分化能力。采取使用唑来膦酸盐小型猪的静脉血，流式细胞仪检测其CD4~+CD25~+T细胞及γδT细胞水平，Q-PCR检测Foxp3及IL-17的表达。研究结果：仅部分使用二膦酸盐的小型猪可以成功分离和培养出骨髓间充质干细胞，其增殖能力明显降低，免疫调节能力受到抑制，且成脂、成骨能力均低于对照动物。二膦酸盐处理的小型猪外周血的CD4~+CD25~+T细胞及Foxp3mRNA水平均明显下降，而γδT细胞和IL-17水平均升高。结论：二膦酸盐对小型猪骨髓间充质干细胞的生理及免疫调节功能均造成影响，且抑制小型猪外周血中的调节性T细胞，升高IL-17。对BMMSCs及免疫功能的影响可能在BRONJ的发病中起到作用。第三部分异基因骨髓间充质干细胞对小型猪BRONJ的治疗研究研究目的：探讨异基因骨髓间充质干细胞移植对小型猪BRONJ的治疗作用，探讨对BRONJ新的有效治疗方法。研究方法：小型猪口腔死骨暴露后8周，将动物分为两组，一组给予静脉输入异体骨髓间充质干细胞，一组输入生理盐水作为对照。通过定期临床观察，CT及组织病理学检查评价BMMSCs对BRONJ的疗效，同时观察BMMSCs治疗对受抑制的小型猪免疫功能的作用。研究结果：在经BMMSCs治疗后，原开放的牙槽窝得到封闭，软组织完全愈合。CT检查显示骨破坏得到愈合。组织病理学检查发现在原骨坏死区有新骨形成。BRONJ小型猪外周血的CD4~+CD25~+T细胞及Foxp3mRNA水平在BMMSCs治疗后均有升高，而γδT细胞和IL-17水有所下降。而且ALP及TRAP水平在BMMSCs治疗12月后升高，而IL-6和IFN-γ水平下降。结论：异基因骨髓间充质干细胞移植可以临床治愈小型猪的二膦酸盐相关颌骨骨坏死，可能为临床治疗BRONJ提供新的有效的治疗方法。