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目的制备符合临床阴证模型的糖尿病慢性皮肤溃疡大鼠模型,观察回阳生肌膏及其拆方对糖尿病大鼠慢性皮肤溃疡不同时相炎症因子影响以及相关促愈因子mRNA表达含量的影响,探讨回阳生肌膏对慢性皮肤溃疡促愈的作用机制。方法150只SD雄性大鼠,随机分为5组：分别分为皮肤缺损组(QS组：剪皮),糖尿病组(DM组：STZ+剪皮),糖尿病加金黄色葡萄球菌组(DMJJ组：STZ+剪皮+金葡菌),糖尿病加激素组(DMJS组：STZ+剪皮+激素注射),糖尿病加激素加异物组(DMYW组：STZ+剪皮+激素注射+异物埋置)五组,制备皮肤溃疡,不给予药物治疗,观察造模后大鼠一般情况,每日称量体重、观察疮面情况、测量创面面积,比较各组愈合情况,观察新生肉芽组织病理形态。2156只大鼠随机抽取6只做为空白对照组(空白组),不做任何处理,余下大鼠造糖尿病模型2w后随机分为5组：1d、3d.5d.7d.14d处理组,处理组内分为皮肤缺损组(缺损组：凡士林纱条),模型对照组(模型组：凡士林纱条),回阳生肌膏组(全方组：回阳生肌膏全方纱条)、温阳益气拆方组(益气组：温阳益气拆方纱条)、活血生肌拆方组(活血组：活血生肌拆方纱条)。缺损组采用皮肤缺损法,其他组采用“注射STZ-激素干预-皮肤缺损-异物埋置”复合因素制备慢性皮肤溃疡模型。各给药组给予相应药膏纱条,在给药的相应时间点处理大鼠,无菌条件下取血清及创面处肉芽组织,用酶联免疫法(ELISA)检测给药1d、3d、5d、7d、14d血清中白细胞介素-1(IL-1)和TXB2含量,3造模方法同上,用酶联免疫法(ELISA)及RT-PCR法检测给药3d、7d、14d血清中及肉芽组织内eNOS的基因表达情况。结果1采用“注射STZ-激素干预-皮肤缺损-异物埋置”复合因素造模方法与其他造模法相比,能显著延长创面愈合时间,并使创面表现为创面光白板亮、分泌物清稀如水,创面处肉芽组织色白或淡而无光泽,全身状态表现为体重增长不明显,蜷缩、尾冷,多尿,少食,大便稀溏、腥臭等阳虚症状。HE染色显示：QS组大鼠新生皮肤组织结构完整,层次清晰,新生表皮上有角质层分布,胶原纤维细胞粗大分布不规则,真皮层内有新生大小血管分布；DM组有单层表皮细胞生成,真皮层内有较细新生胶原纤维和大量炎症细胞,无新生血管形成；DMJJ组有多层新生表皮细胞规则分布,组织内有组织液、血浆凝固成分及炎症细胞浸润,有少量血管生成；DMJS组真皮边缘无表皮生成,组织内有少量炎症细胞及组织液浸润,无血管生成；DMYW组未见表皮生成,无炎症细胞浸润,无任何愈合倾向。Masson染色显示：光镜下蓝色显示胶原纤维,QS组胶原纤维粗长,密布且规则排列；DM组胶原纤维较粗,但比QS组少而细,围绕炎症细胞无序排列；DMJJ组胶原纤维短小,零星分布于细胞间；DMJS组胶原纤维细,多而杂乱充斥于细胞间隙中；DMYW组胶原纤维生成少,细而杂乱、散在分布。2不同时相血清中炎症因子表达,IL-1α含量,给药3d,益气组显著高于空白组和模型组(P<0.05),高于全方组和活血组(P<0.05)；给药5d,全方组显著高于空白组和模型组(P<0.05)；给药7d,各给药组显著高于空白组和模型组(P<0.05),全方组高于拆方组(P<0.05)；给药14d,模型组和活血组低于空白组(P<0.05)。TXB2含量,给药3d,正常组和全方组高于空白组(P<0.05)；给药5d,全方组高于空白组和正常组(P<0.05)；给药7d,益气组高于空白组和模型组(P<0.05),高于全方组和活血组(P<0.05)；给药14d,活血组高于空白组和模型组(P<0.05),高于全方组和益气组(P<0.05),空白组和正常组低于其他各给药组(P<0.05)。3不同时相血清中eNOS表达含量,给药3d,各组与模型组比均有统计学差异(P<0.05),益气组与空白组、正常组、全方组比有统计学差异(P<0.05),活血组与空白组、全方组比有统计学差异(P<0.05)；给药7d,模型组与各组比均有统计学差异(P<0.05),全方组与空白组、正常组及益气组比有统计学差异(P<0.05),活血组与空白组、正常组、益气组及模型组比有统计学差异(P<0.05)；给药14d,模型组与全方组、益气组、活血组比有统计学差异(P<0.05),全方组与空白组、正常组比有统计学差异(P<0.05).肉芽组织内eNOS基因表达含量,由RT-PCR结果可看出,给药3D,全方组eNOS含量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)；给药7D,各给药组eNOS含量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),正常组高于模型组和活血组,差异有统计学意义(P<0.05),益气组高于正常组、全方组和活血组,差异有统计学意义(P<0.05)；给药14D,活血组eNOS合量高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1“注射STZ-激素干预-皮肤缺损-异物埋置”复合因素造模方法能使大鼠阳虚症状明显,创面愈合时间延长,创面表现出“阴证”证型特点,与临床“阴证疮疡”相似。2回阳生肌膏能适当提高大鼠血清中IL-1α及TXB2的含量,益气温阳药促进免疫抑制状态的大鼠炎症反应,活血通络药在后期促炎作用明显。3回阳生肌膏可以增加血清及肉芽组织中eNOS的表达含量,益气温阳药在给药早期对促愈因子的促表达作用明显,活血通络组在给药后期促愈作用明显。回阳生肌膏通过温阳益气药鼓动气机,使气旺血生,阳生阴长,使无形之气化为有形之物。