Decory receptor 3(DcR3)是1998年由Pitti RM等首先发现的一种陷阱分子，属于肿瘤坏死因子受体超家族的成员。DcR3基因定位于染色体20q13.3上，该基因编码一种无明显跨膜序列的分泌型蛋白，能特异性地结合FasL，阻断由Fas／FasL系统介导的细胞凋亡。有作者在研究中发现人类的多种恶性肿瘤(如肺，胃肠道组织、淋巴细胞、神经组织等的恶性肿瘤)中均存在DcR3基因的过度表达和扩增，而且这种过度表达仅发生于肿瘤细胞，肿瘤周围的正常组织则检测不到该基因的表达。这些研究结果陆续发表在《Nature》和《Science》等刊物上。随后在DcR3基因的功能研究中发现：DcR3基因的过度表达与肿瘤的免疫逃逸及抵抗机体的细胞凋亡机制有关，在肿瘤的发生和发展中起重要作用。许多肿瘤治疗研究的突破与改变肿瘤细胞凋亡机制密切相关。诱导凋亡治疗将成为人类征服肿瘤的有力手段。纵观国外的研究结果，DcR3在恶性肿瘤中的过度表达和扩增是一个非常值得我们关注的课题。 DcR3在肿瘤免疫逃逸中的重要作用提示我们，如果能从蛋白水平甚至基因水平阻断肿瘤组织DcR3的表达，将积极推动DcR3阳性肿瘤的治疗，甚至阻断恶性肿瘤的形成或复发。由于DcR3表达分泌型蛋白，因此，血清中的DcR3蛋白是一个早期筛查DcR3阳性表达肿瘤的很有诊断价值的分子Marker。我们在这方面已进行了初步研究，在肝癌等许多恶性肿瘤病人的血清中检测到DcR3蛋白的明显升高，部分阳性病人可达正常对照人群的20倍。然而，DcR3基因在原发性肝癌中的表达以及扩增情况，该基因表达与肝癌细胞凋亡的关系、在肝癌形成中的作用等，国内外尚未见研究报道。肝癌是人类常见的恶性肿瘤，是危害人类健康的重大疾病。通过近半个世纪多学科、多中心的共同努力，人们在肝癌的病因、诊断及治疗等多方面均取得了突破性的进展。但肝癌仍在肆虐着人类的生命，对肝癌我们还远远未达到基本控制的地步．由于DcR3基因表达与肿瘤细胞抵抗机体细胞凋亡机制之间的密切关系，研究DcR3基因在肝癌细胞抵抗凋亡中的作用是一个很有价值的课题。 浙江大学博士学位论文 根据国内外的研究动态，本课题利用先进的分子生物学、免疫组织化学以及细胞学 研究技术，研究肝癌中IkR3基因的表达和扩增情况，分析基因扩增在过度表达中的作 用，并进一步观察该基因表达在肝癌细胞凋亡和增殖发生中的作用；此外，我们还对DcR3 基因表达在肝癌细胞化疗抗性中的作用作出了初步探讨。研究结果为弄清肝癌抵抗机体 的细胞凋亡中的作用机制奠定一定的实验和理论基础，有望为肝癌的诱导凋亡治疗开辟 一个全新的研究领域。 第一部分：原发 癌中DcR3基因的表达和扩憎及其意义 目的：研究DCR3基因在原发性肝癌中的表达和扩增情况，探讨该基因在肝癌中过度表 达的原因，比较具有不同临床及病理学因素的肝癌其D。R3基因表达和扩增的差 异。 方法：选择48例经手术和病理学检查证实的原发性肝癌病人的组织，运用r－PCR检测 癌组织及癌旁肝组织中的DcR3基因mRNA表达，荧光定量PCR检测肝癌组织中该 基因的扩增情况，SABC免疫组织化学染色原位检测肝癌组织中D。R3蛋白的表达。 统计分析肝癌中DcR3基因表达与该基因扩增的相关性，研究DcR3基因在肝癌中 过度表达的原因，比较不同临床及病理学类型肝癌中该基因表达及扩增的差异。 结果：48例肝癌组织中DCR3基因CRNA阳性表达29例，阳性表达率为60．4％（29／48）； 而对应的癌旁组织中未见阳性表达。该基因的mRNA表达与肿瘤大小、临床分期 及肿瘤是否有浸润和转移有关（P＜0．05），但与肿瘤有无包膜、癌栓及肿瘤的结节 数目无明显相关性（P＞0．05）。DcR3 基因 mRNA阳性表达组的扩增倍数为 l．53士0．82，阴性表达组的扩增倍数为0．75士0 33，两者的差异有显著性 （P＜0．of）。 48例病人的DeR3基因扩增倍数为0．18～3．86，平均值为1．22 士0．77，扩 增倍数超过2的病人共7例，占14．6％（7／48）。以扩增倍数o、刀将48例病 人分成两组，比较不同扩增倍数肝癌病人该基因毗肌表达的差异，结果发现其 差异有显著性（P＜0．of）；具有不同临床及病理学特征的肝癌，其 DCR3基因的扩 增倍数无明显差异（P＞0．05）。在对RT－PCR扩增产物进行测序分析的研究结果中， 发现有3个位点存在点突变。 肝癌组织中DcR3蛋白表达的免疫纽化检测结果发现：肝癌组织中存在D。R3 蛋白的阳性表达，其阳性信号位于肝癌细胞的胞浆中，周围正常的肝组织未见阳