研究目的:实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种慢性、炎症性、脱髓鞘中枢神经系统疾病,是多发性硬化症(MS)的成熟动物模型,其特征在于炎症、脱髓鞘、轴突损伤、胶质增生和血脑屏障的破坏。虽然T辅助(Th)细胞Th-1和Th-17被认为是自身免疫炎症反应的主要效应物,但是巨噬细胞和小胶质细胞也在发病中起重要作用。Linc RNA-Cox2在TLR4激动剂刺激的巨噬细胞中高表达,参与众多类别免疫基因的调节,但有关其如何调控巨噬细胞和小胶质细胞介导的EAE病理发生的研究尚属空白。因此,本研究拟探究linc RNA-Cox2通过调控巨噬细胞和小胶质细胞来调节EAE的发生发展机制。方法:通过慢病毒的方法我们构建了敲低lincRNA-Cox2的小鼠模型,GFP免疫荧光染色确定了慢病毒的感染效率。利用髓鞘少突细胞糖蛋白肽(MOG)皮下诱导建立EAE小鼠模型研究敲低linc RNA-Cox2对EAE临床评分的影响。H&E染色和Fast blue染色研究中枢神经系统(CNS)的炎症浸润和脱髓鞘情况,Pecoll分离CNS单核细胞,流式技术研究浸润的外周炎症细胞和CNS常驻小胶质细胞的变化。激光共聚焦研究敲低linc RNA-Cox2后自噬小体在小胶质细胞的共定位情况。体外建立骨髓来源的巨噬细胞(BMDM)和原代小胶质细胞的极化模型,研究敲低linc RNA-Cox2对巨噬细胞和小胶质细胞自噬对IL-1β等细胞因子的影响。同时,体外培养分离BMDM和小胶质细胞系BV2蛋白,western blot进一步研究其调控p65核转位的机制。结果:我们构建的慢病毒可以明显敲低小鼠体内linc RNA-Cox2的表达,而敲低linc RNA-Cox2导致EAE发病明显减轻,发病率降低,炎症细胞浸润和脱髓鞘程度降低。进一步分析浸润的细胞类型发现,敲低linc RNA-Cox2组小鼠激活的巨噬细胞和小胶质细胞比例降低,静息的小胶质细胞比例升高。激光共聚焦研究发现敲低linc RNA-Cox2导致EAE小鼠脑内小胶质细胞自噬的增加。体外利用LPS刺激BMDM细胞和原代小胶质细胞,发现敲低linc RNA-Cox2抑制Nlrp3和Asc基因的表达,导致NLRP3炎症小体激活降低和对TRIF剪切的减少,从而促进了自噬,而自噬会进一步抑制炎症小体的激活,二者协同作用抑制了IL-1β的分泌,最终有助于EAE的缓解。利用BMDM和小胶质细胞系BV2进一步研究其调控机制发现,linc RNA-Cox2可以与p65直接结合,敲低linc RNA-Cox2可以抑制p65入核从而降低相关炎症基因的表达,抑制巨噬细胞和小胶质细胞向M1型的极化,导致IL-1β分泌的减少。结论:敲低linc RNA-Cox2可以降低EAE的临床评分,降低发病率,抑制炎症细胞浸润和降低CNS脱髓鞘的程度;抑制浸润的巨噬细胞和CNS常驻小胶质细胞的激活,维持小胶质细胞的静息。敲低linc RNA-Cox2抑制巨噬细胞和小胶质细胞M1型相关细胞因子和炎症介质的表达,同时发现敲低linc RNA-Cox2抑制NLRP3炎症小体激活和TRIF剪切,促进自噬的发生,二者协同抑制促炎因子的IL-1β分泌,从而抑制了EAE的发病。linc RNA-Cox2可以与p65直接结合,敲低linc RNA-Cox2可以抑制p65入核从而降低Nlrp3和Asc等相关炎症基因的表达,抑制巨噬细胞和小胶质细胞向M1型的极化。