论文部分内容阅读
我国优质粗饲料资源缺乏,在反刍动物生产中通常添加大量高精料以提高经济效益。过量易发酵碳水化合物在瘤胃中快速降解,会造成一系列营养代谢性疾病的发生,使亚急性瘤胃酸中毒(SARA)的发病率提高。SARA会导致瘤胃pH下降、微生物区系紊乱、免疫机能受损、瘤胃毒性物质释放进而引发一系列的炎症反应,给反刍动物养殖业带来巨大的经济损失。本研究旨在通过体内外试验,探究酵母菌制剂对SARA状态下湖羊瘤胃发酵、微生物区系、血液生化指标、抗氧化功能和免疫机能的影响,探讨酵母菌制剂对SARA的调控作用,为酵母菌制剂在反刍动物生产中的应用提供依据。试验1酵母菌制剂对湖羊体外SARA模型的缓解作用试验采用体内外相结合的研究方法建立体外SARA模型。选取3只体重相近且安装有永久性瘤胃瘘管的健康成年去势湖羊作为体外发酵瘤胃液的供体。通过体外批次培养,探讨两种不同的酵母菌制剂——活性干酵母(ADY,Active Dry Yeast)和酵母培养物(YC,Yeast Culture)对SARA模型的瘤胃发酵参数的影响,分别设立0%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、和2.5%等6个梯度进行24 h体外培养,并用多项指标综合指数(MFAEI)进行评定筛选出ADY和YC的最适添加剂量。试验结果表明:1)利用体内外相结合的方法可成功建立体外SARA模型。2)添加ADY可显著提高发酵液pH(P<0.05),显著降低乳酸浓度(P<0.05),显著提高发酵液中NH3-N浓度(P<0.05),提高丙酸百分比和提高TVFA含量(P<0.05),对丁酸百分比无显著影响(P>0.05),其中以添加底物干重的1.5%的ADY的作用效果最佳。3)添加YC可显著提高发酵液pH(P<0.05),显著降低乳酸浓度(P<0.05),显著提高发酵液中NH3-N浓度(P<0.05),显著降低乙酸比例(P<0.05),显著提高丙酸比例、丁酸比例和TVFA含量(P<0.05),其中以添加底物干重的2.0%的YC的作用效果最佳。试验2添加酵母菌制剂对高精料诱发亚急性瘤胃酸中毒湖羊瘤胃发酵参数和瘤胃微生物菌群的结构的影响选取6只体重相近且安装有永久性瘤胃瘘管的健康成年去势湖羊,采用3×3拉丁方试验设计,探究由高精料诱发SARA状态下添加ADY和YC对瘤胃发酵和瘤胃微生物区系的影响。试验分为3组,每组2只重复,分别为对照组(CON)、ADY组和YC组,ADY组和YC组添加ADY和YC的量参考试验1所得结果。试验共分为3期,每期21天,其中预饲期7天,诱导期7天,试验期7天,在预饲期日粮中非纤维碳水化合物/中性洗涤纤维(NFC/NDF)的比例为0.99,诱导期日粮NFC/NDF 比例逐渐提高到2.21直至试验动物发生SARA,试验期日粮NFC/NDF 比例为2.21,于每期试验期最后一天饲喂前(0 h)、饲喂后3h、6h、9h和12h进行样品采集。测定每个时间点瘤胃液pH、NH3-N、乳酸、纤维素酶活和VFAs,将饲喂后6h瘤胃液做瘤胃微生物区系分析。试验结果表明:1)通过逐渐提高饲料NFC/NDF水平,可成功建立湖羊体内SARA模型,且瘤胃液pH值每天低于5.8的时间超过3 h。2)添加ADY可显著提高饲喂前(0 h)和饲喂后12 h的瘤胃液pH值(P<0.05),缩短pH<5.8的时间;显著降低瘤胃液乳酸和NH3-N浓度(P<0.05);显著提高纤维素酶活(P<0.05);显著降低乙酸比例(P<0.05),显著提高丙酸比例(P<0.05),使其向丙酸发酵型转化,显著提高TVFA含量(P<0.05)。3)添加YC可显著提高瘤胃液pH值(P<0.05),缩短pH<5.8的时间;显著降低瘤胃乳酸浓度;显著提高NH3.N和纤维素酶浓度;显著提高丙酸比例(P<0.05),使其向丙酸发酵型转化,显著提高TVFA含量(P<0.05)。4)添加ADY和YC对瘤胃微生物丰富度和多样性无显著影响,但能显著降低厚壁菌门和放线菌门相对丰度(P<0.05),显著提高拟杆菌门相对丰度(P<0.05);显著降低瘤胃球菌属和双歧杆菌均属相对丰度(P<0.05)。添加YC显著提高新月单胞菌属的相对丰度(P<0.05)。综上,添加ADY和YC缓解SARA症状,改变瘤胃微生物菌群结构。试验3添加酵母菌制剂对高精料诱发亚急性瘤胃酸中毒湖羊血液生化指标、免疫及抗氧化功能的影响试验设计与试验2相同,于每期试验期最后一天饲喂前,颈静脉采血用于血液生化指标、抗氧化指标和免疫指标的测定。试验结果表明:1)添加ADY和YC可显著降低血清中谷丙转氨酶含量(P<0.05),显著升高尿素氮含量(P<0.05);添加YC可显著降低血液中的甘油三酯含量(P<0.05),添加ADY对其没有影响(P>0.05)。2)添加YC可通过显著降低血清中谷丙转氨酶含量(P<0.05),显著升高谷胱甘肽过氧化物酶含量和总抗氧化能力(P<0.05),对血清中过氧化氢酶和总超氧化歧化酶含量均无差异(P>0.05),减少SARA所造成的机体细胞损伤,提高抗氧化能力。添加ADY对血清中抗氧化功能指标均无显著影响(P>0.05)。3)添加YC可通过显著降低Toll样受体4、白介素1β、珠触蛋白、血清淀粉蛋白A、脂多糖结合蛋白和脂多糖含量(P<0.05),显著升高白介素-10和免疫球蛋白A含量(P<0.05),降低SARA所造成的炎症反应提高机体免疫力。添加ADY可通过显著降低Toll样受体4、白介素1β、白介素-6、肿瘤坏死因子α和珠触蛋白含量(P<0.05),显著升高免疫球蛋白A浓度(P<0.05),在一定程度上缓解SARA所造成的炎症反应提高机体免疫力。