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研究背景：具有高敏感性和特异性的诊断指标对于肝硬化的诊断、病情进展的随访和治疗起着十分重要的作用。大量的研究表明循环中miRNA可作为许多疾病,包括慢性肝病的诊断指标。本研究的目的是对肝硬化患者血浆miRNA的表达水平进行检查,探讨血浆miRNA作为肝硬化无创诊断标志物的意义。实验方法：该研究为多阶段的病例对照研究,过程包括以下几部分：第一部分,为研究的筛选阶段(primary exploration phase),80个血浆样本(其中25个乙肝肝硬化、22个慢性肝炎和33个正常对照)处理后进行芯片全基因组miRNA表达检测。该芯片共包含有723个常见的miRNA。初筛结果经分析后,挑选出6个miRNA进行第二部分的验证工作。第二部分为研究的验证和建模阶段(trainning phase),首先,6个miRNA在41个样本中(20个乙肝肝硬化、9个慢性乙肝和12分正常对照)运用qPCR的方法进行验证,挑选出2个具有较高稳定性的miRNA,进一步在其余141个样本(70个乙肝肝硬化、23个慢性乙肝和48个正常对照)中运用qPCR的方法进行验证,结果应用Logistic回归进行整合。第三部分为诊断模型的验证阶段(validation phase),在第二部分得到的miRNA诊断模型在两个独立队列中分别进行验证,以保证该指标的稳定性。其中一个队列有44个样本,包括13个无临床表现的早期肝硬化、25个慢性肝炎和6个正常对照,所有样本都有肝穿病理结果明确诊断；另一个队列有92个样本,包括47个非乙肝肝硬化、7个非乙肝相关的慢性肝炎和38个正常对照。实验结果：1.通过全基因组miRNA表达芯片检测,6个miRNA (miR-106b、miR-122、 miR-144、miR-181d、miR-181b、和 miR-584)被挑选出来进行下一步qPCR的验证。3个miRNA(包括niR-106b、miR-122和 miR-144)在乙肝肝硬化患者中明显低于慢性乙型肝炎患者；而与正常对照相比,乙肝肝硬化病人血浆中miR-181d和miR-181b水平明显升高,miR-584的水平明显降低。2.验证阶段对6个miRNA进行验证,其中2个miRNA(miR-106b和miR-181b)具有较高的稳定性,乙肝肝硬化中miR-106b明显下调,而n miR-181b发上了明显的上调。3. miR-106b和miR-181b对乙肝肝硬化具有较高的诊断价值,ROC曲线下面积分别为0.715(95%CI,0.641-0.789；敏感性=0.804,特异性=0.522)和0.833(95%CI,0.775-0.892；敏感性=0.678,特异性=0.870)。4.对miR-106b和miR-181b进行整合建模建立肝硬化诊断模型：1.763×miR181b-14.622×miR106b-0.367。整合后miRNA诊断模型ROC曲线下面积为0.882(95%CI,0.834,0.929；敏感性=0.856,特异性=0.750),具有较高的诊断价值。5.在早期肝硬化组中对诊断模型进行进一步验证发现,miRNA诊断模型对早期肝硬化具有较高的诊断价值,ROC曲线下面积为0.774(95%CI,0.589-0.959；敏感性=0.615,特异性=0.935)。6. miRNA诊断模型与肝硬化的纤维增生相关,但与病因无关。非乙肝肝硬化组验证结果：ROC曲线下面积为0.915(95%CI,0.854-0.976；敏感性=0.787,特异性=0.932),说明该模型同样适用于其它类型的肝硬化的诊断。7. miR-106b和miR-181b与肝脏炎症程度无关,与其它临床指标,包括总胆红素、白蛋白、ALT、凝血酶原时问和国际标准化比值也无线性相。说明miR-106b和miR-181b为纤维形成特异性的指标,与肝脏炎症程度、肝功能和肝细胞损害无直接相关。结论：我们的研究发现miR-106b和miR-181b可对临床肝硬化的患者有较高的诊断价值,特别适用于诊断早期肝硬化的患者。