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本研究以新疆杨(Populus alba L.var.pyramidalis.)为材料,在建立无菌快繁技术体系的基础上,选择组培苗叶片和茎段诱导愈伤组织,建立新疆杨悬浮细胞系,进而就不同起始材料原生质体分离、纯化技术进行了探讨,并初步开展了原生质体培养研究。主要结果如下:1.建立了新疆杨无菌苗快繁、愈伤组织培养以及悬浮细胞的培养体系,为原生质体游离、培养奠定了基础。首先建立了新疆杨无菌苗快繁体系。其中适宜的茎段启动培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L;最佳叶片分化培养基为1/2MS+BA 1.00mg/L+TDZ 0.05 mg/L;生根培养基为1/2MS+IBA 0.03mg/L。新疆杨同一无菌苗植株不同部位材料的愈伤组织诱导率几乎没有差异,适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 3.0mg/L,诱导率达100%。经过2～4次继代的愈伤组织,生长速度较快,由色泽浅黄而鲜艳的小颗粒组成,适宜建立胚性悬浮细胞系。激素水平、起始接种量及继代周期等对新疆杨悬浮细胞培养有重要影响,其最佳培养基为MS+2,4-D 1.5mg/L+ZT 1.0mg/L+NAA 0.02mg/L+MES 600mg/L+CH500mg/L+谷氨酰胺200 mg/L+天门冬氨酸150mg/L,适宜的起始接种量为30ml液体培养基加入鲜重2g胚性愈伤组织;继代培养起始接种浓度为30ml液体培养基加入lml悬浮细胞,继代周期8～10d。2.建立了新疆杨组培苗叶片、愈伤组织、悬浮细胞原生质体游离、纯化技术体系,获得了高质量的原生质体。新疆杨不同起始材料的原生质体游离最适酶液组合不同,叶片采用3.0%Cellulase R-10+0.5-1.5%Macerozyme R-10+0.5%Hemicellulase+0.1-0.5%PectolaseY-23;愈伤组织采用0.5%Cellulase RS+3.0%Cellulase R-10+1.0%Macerozyme R-10+0.5%-1.5%Hemicellulase+0.5%-1.5%Pectolase Y-23;悬浮细胞采用3.0%CellulaseR-10+1.0%Cellulase RS+1.0%Hemicellulase+2.0%Pectolase Y-23+1.0%Macerozyme R-10。在添加0.6mol/L甘露醇、600mg/L MES、1g/L牛血清蛋白、pH值5.8的条件下酶解8h,可获得较高产量和活力的原生质体。不同材料和不同取材时间对新疆杨原生质体产量和活力有显著影响,采用继代30d的无菌苗第2～5片叶片的原生质体产量最高,达到1.57×107个/g·FW,活力为79.41%;继代4～10d的悬浮培养物能获得最高1.25×10’个/g·FW的原生质体产量,活力最高达81.56%;采用继代2～4次后生长20d左右的愈伤组织材料能获得6.52×106个/g·FW的产量,活力达81.02%。新疆杨原生质体纯化以上浮法蔗糖等密度离心最好,纯净原生质体产量为2.23×106个/g·FW,活力保持在65.55%。3.初步开展了新疆杨原生质体培养研究,获得了一定的愈伤组织。不同的激素种类和浓度的配比对新疆杨原生质体分裂增殖影响显著,采用液体浅层培养法的培养效果最好,最佳培养基为KM8p+2,4-D 3.0mg/L+ZT 1.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+MES 600mg/L+牛血清蛋白1g/L+CH 500mg/L+谷氨酰胺200 mg/L+天门冬氨酸150mg/L+0.6mol/L葡萄糖,适宜的培养密度为2.5×105/ml,在此培养条件下的细胞分裂频率达5.83%,植板率达4.1%,现已获得了肉眼可见的小愈伤组织团。