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本文研究了苎麻叶中活性成分—绿原酸及红豆杉(Taxus chinensis(Pilger)Rehd)中活性成分—紫杉醇的提取、纯化及测定方法。 (1)确定了以乙醇水溶液提取绿原酸和紫杉醇的最优条件。使用pH=4.0的70%的乙醇溶液在70℃下浸提苎麻叶三次,每次浸提时间2h,料液比为1:10,绿原酸的浸提率达83%;用85%乙醇以1:10的料液比在75℃下浸提两次,每次2h,紫杉醇的提取率为90.24%。 (2)分别探讨了流动相、酸种类等因素对高效液相色谱(HPLC)分析绿原酸和紫杉醇含量的影响。确定了绿原酸的最佳色谱条件:ODS色谱柱(200×4.6 mm,5μm),18%甲醇+1.0%的乙酸为流动相,流速1.0mL/min,检测波长326nm,进样体积6μL,分析时间为14 min。该方法校准曲线为Y=1.618×10~6X-23081.3(r=0.9997),线性范围为20mg/L-160mg/L,方法的加标回收率为97%—101%,绿原酸与相邻杂质的分离度为1.55,该方法可满足分析要求,测得苎麻叶中含绿原酸0.52%;紫杉醇的最佳测定条件为:λ=227nm,ODS色谱柱(200×4.6 mm,5μm),甲醇:水:乙酸(v/v)=55:44:1为流动相,流速1.0mL/min,进样浓度在0.05mg/mL—0.5mg/mL范围内,分析时间为28 min,该方法校准曲线为y=13021.7+1.01×10~6x(r=0.9990),方法的加标回收率为96%—104%。 (3)采用比色法测定树脂纯化部分流出液中绿原酸的含量。在最佳比色及检测条件下拟定的操作程序如下:取适量溶液于5mL比色管中,加热挥去甲醇,加入1.00mL水,0.100mL 12.5%(v/v)的醋酸水溶液,2.00mL 7%(w/w)的尿素水溶液,0.250mL 0.5%(w/w)的亚硝酸钠水溶液混合均匀,3min后加入0.500mL 5%(w/w)的氢氧化钠水溶液后定容至刻度。比色,以水为空白,1h之内测量体系在510nm处的吸光光度值。该方法标准曲线为A=0.037+0.1602X(r=0.9998),线性范围为0.05mg-0.6mg,方法的加标回收率为95%—107%,测硕士学位论文摘要定绿原酸浓度的RSD二2 .4%。(4)研究了层析法处理芒麻叶浸提液和红豆杉浸提液的工艺条件。 采用AB一8做柱填料,采用15 x 400Inln层析柱,试验装置简单,吸附及洗脱易于进行,试验中采用了无毒无污染的乙醇溶液,操作安全方便。通过试验确定上柱样为pH=4 .0含绿原酸1.4mg/mL的溶液(加入4%的NaCI,w/v),吸附流速为1 .SBV/h,且上柱样重复过柱一次,当吸附时间达到30min时用pH=9 .0的30%乙醇溶液进行洗脱,洗脱剂流速为 1.OBV/h,洗脱率达95%,AB一8对绿原酸的选择性好,通过吸附一脱附试验确定树脂分离绿原酸的最大吸附量为23.Slng/mL树脂,可使产品中绿原酸的含量由3.53%提高到41.31%。 采用碱性氧化铝作柱填料,层析柱柱尺寸为:巧IlunX250Inln,通过试验确定最佳层析条件为:物料在柱中的反应时间为30min,2.0:98.0(V/V)的甲醇/三氧甲烷为平衡液,4.0:96.0(V/V)的甲醇/三氯甲烷为洗脱液,经一步氧化铝层析,可使产品中紫杉醇的含量由1.87%提高到16.59%,紫杉醇的回收率接近170%。