Notch信号通路分子在hUMSCs向胰岛前体细胞诱导过程中的表达

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目的:探讨Notch信号节点分子Notch1、Hes1在人脐带间充质干细胞(hUMSCs)向胰岛前体细胞分化过程中的表达及其与Ngn3的关系。  方法:  1.分离培养并鉴定hUMSCs;  2.采用联合分阶段诱导法,取P5代hUMSCs向胰岛前体细胞分化,倒置相差显微镜观察诱导前后(第7天、14天、21天)细胞形态变化,免疫细胞化学技术检测诱导后Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素的表达;  3.电镜观察诱导前后的胰岛前体细胞与对照组hUMSCs的结构差异;  4.诱导后(第7天、14天、21天)分别取细胞进行免疫细胞化学法、real-time PCR、Western-blot检测Notch信号通路相关分子以及Ngn3的表达变化;  5.加入γ分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitor)DAPT后,Western-blot检测Notch信号通路相关分子以及Ngn3的表达变化。  结果:成功分离培养hUMSCs,经诱导后细胞胞体呈现宽大形态,并出现胰岛前体细胞的集落,免疫细胞化学技术检测诱导21天后细胞Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素均呈阳性表达,电镜结果显示胞体内有分泌颗粒;Western-blot检测Ngn3在诱导过程中逐渐升高,至诱导14d达到峰值,21d下降;Notch1在诱导后7d时最高,对照组最低;Hes1的表达7d、14d与对照组无明显差异,于21d下降;添加DAPT后,Notch信号通路节点分子Hes1表达量下降,同时存在Ngn3表达量升高。  结论:Notch信号通路节点分子与Ngn3表达可能存在相互抑制的关系,通过抑制Notch信号通路后,Notch信号通路节点分子表达量降低,Ngn3表达量升高。由此推测,Notch信号通路的持续活化可能抑制了hUMSCs向胰岛前体细胞分化。
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