AngⅡ、醛固酮致心肌纤维化及Wnt1在其中的作用

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:chengshisanren
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目的探讨大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)经血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ,Ang Ⅱ)、醛固酮及其受体拮抗剂干预后CFs细胞活性的改变以及对细胞中致心肌纤维化相关基因表达的影响,同时深入研究Wnt1基因在该过程中的作用,为预防和控制心肌纤维化提供新的理论依据。方法采用胶原酶II消化法、差速贴壁法提取纯化CFs,在AngⅡ、醛固酮及其受体拮抗剂作用下,应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)活细胞计数试剂盒检测成纤维细胞活性,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerasechain reaction, RT-PCR)方法检测细胞中靶基因及相关基因mRNA表达的变化,Western blot方法检测细胞中靶基因及相关基因蛋白表达的变化。经AngⅡ、醛固酮干预的心肌成纤维细胞,应用RNAi技术敲低Wnt1基因表达后,分别应用CCK-8、RT-PCR、Western blot方法检测细胞活性、靶基因及相关基因表达的变化。结果与对照组比较,AngⅡ、醛固酮独立干预可明显促进CFs细胞活性增加,AngⅡ、醛固酮联合干预的细胞增殖活性较AngⅡ、醛固酮单独干预更高,且AngⅡ、醛固酮的受体拮抗剂氯沙坦、螺内酯可显著抑制AngⅡ、醛固酮诱导的细胞增殖效应;与对照组比较,AngⅡ、醛固酮可显著促进心肌成纤维细胞I型胶原前胶原A1(collagen, type I, alpha1,Col1a1)、III型胶原前胶原A1(collagen, type III, alpha1,Col3a1)、基质金属蛋白酶1(matrixmetalloproteinase1,MMP1) mRNA和蛋白表达,同时抑制基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitors of the factor matrix metalloproteinase1,TIMP1)mRNA和蛋白表达;和醛固酮组比较,AngⅡ组在促进心肌成纤维细胞Col1a1、Col3a1、MMP1基因表达增加和TIMP1减低方面作用更强;氯沙坦、螺内酯可显著抑制AngⅡ、醛固酮诱导的Col1a1、Col3a1、MMP1mRNA和蛋白表达的增加,同时升高TIMP1mRNA和蛋白表达。经AngⅡ、醛固酮干预的心肌成纤维细胞,利用Wnt1-siRNA敲低Wnt1基因后,细胞增殖活性明显降低,靶基因Wnt1及胶原基因Col1a1、Col3a1表达均相应减低。结论AngⅡ、醛固酮可促进体外培养大鼠CFs细胞数量增殖和增加细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,AngⅡ、醛固酮同时干预时具有协同和叠加效应,且AngⅡ在促进心肌胶原表达方面较醛固酮更强;而它们的拮抗剂氯沙坦、螺内酯可抑制这些效应,其作用机制可能通过影响MMPs/TIMPs的平衡,使心脏胶原合成与分解代谢紊乱,增加CFs细胞增殖活性,促进心脏纤维化,而氯沙坦、螺内酯可通过抑制CFs细胞增殖和胶原表达抑制心肌纤维化。体外培养的心肌成纤维细胞转染Wnt1-siRNA后,AngⅡ、醛固酮的促细胞增殖活性明显减低,胶原蛋白表达明显降低,Wnt信号通路可能参与AngⅡ、醛固酮促心肌纤维化的信号转导过程。
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