论文部分内容阅读
目的：研究p16基因突变与微卫星不稳定性在非霍奇金淋巴瘤发生发展中的作用，以及p16基因改变与微卫星不稳定性和杂合性缺失之间的关系，探讨p16基因内exon1、exon2的分子遗传学改变与非霍奇金淋巴瘤的关系。
方法：采用PCR-SSCP法对40例已确诊NHL进行p16基因外显子1、2的突变研究：通过Genetools软件分析对外显子1、2发生突变的样本进行测序，选取p16基因内部微卫星位点D9S265，D9S259，D9S169，D9S161(采用DNA抽提试剂盒提取石蜡包埋组织基因组DNA、全血基因组DNA-PCR扩增-变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳-银染法-全自动凝胶成像系统分析)，分别检测40例NHL的MSI和LOH状况。
结果：40例NHL中，p16基因总突变率为35.0％(14/40)。纯合性缺失率为5.0％(2/40)。惰性、侵袭性和高度侵袭性组突变率分别为25.0％(1/4)、34.38％(11/32)和50.0％(2/4)，NK/T细胞和B细胞性NHL突变率分别为30.77％(4/13)和37.04％(10/27)。MSI和LOH的总阳性率分别为50％(20/40)与37.5％(15/40)。各位点MSI与LOH频率分别介于12.5％～27.5％和12.5％～17.5％之间。D9S161和D9S259位点MSI组的p16突变率均高于MSI阴性组，而D9S265和D9S169则与之相反(均P>0.05)。四个微卫星位点LOH组的p16基因改变明显高于LOH阴性组，其中D9S169位点LOH组与LOH阴性组比较(P=0.004，P<0.01)，两者之间差异有非常显著性意义。D9S169位点LOH组的p16基因外显子2改变(突变和缺失)与LOH阴性组比较，差异有非常显著性意义(P=0.001，P<0.01)；四个微卫星位点LOH组的p16基因外显子2的改变(突变和缺失)明显高于外显子1。D9S161与D9S169位点LOH的p16基因纯合性缺失与LOH阴性组比较差异均有显著意义(其P值分别为0.019和0.027，均小于0.05)。
通过测序，4例肿瘤样本除1例肿瘤组织表现为正常序列，如exon2b(T10)，其余3例肿瘤组织，相对正常组织，全部发生了改变。如：exon1(T3)，在序列起始位置丢失10个碱基(TGGTGGCCAC)，exon2a(T11)，在序列57碱基处G置换成A、81碱基处出现T的丢失、82碱基处A置换成G、114碱基处A置换成G，exon2C(T10)，在序列起始位置增加1个碱基C。
结论：①NHL中存在较高p16基因突变率，提示其突变可能参与NHL的发生、发展。②NHL中存在MSI和LOH，提示MSI和LOH可能参与NHL的发生、发展。③通过统计分析，微卫星位点的MSI与LOH主要影响p16基因外显子2的突变和缺失。④4例经Genetools软件分析对外显子1、2发生突变的肿瘤样本进行测序有3例证明有碱基的丢失、置换或增加。⑤D9S169位点的LOH与p16基因外显子2改变之间比较，差异有非常显著性意义；D9S161与D9S169位点的LOH和p16基因纯合性缺失之间差异有显著性意义；表明微卫星位点D9S161和D9S169与p16基因的关系较紧密。