海水养殖鱼类寄生新贝尼登虫(Neobenedenia)的数量形态学和分子生物学研究

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本文采用形态学观察、数量形态学研究、RAPD分析和28S rDNA基因同源序列比较等技术方法,从不同层次对福建沿海养殖鱼类暴发流行性寄生虫病害的主要病原——新贝尼登虫(Neobenedenia Yamaguti,1963)进行了研究,结果如下: 1.光学显微镜下镜检发现,寄生在厦门海区养殖高体鰤(Seriola dumerili Risso)体表的新贝尼登虫大部分呈现出鱾新贝尼登虫(Neobenedenia girellae Hargis)的形态特征,即虫体较肥大、睾丸边缘有缺刻等,但也有一些虫体较瘦小、睾丸边缘光滑无缺刻,表现出梅氏新贝尼登虫(Neobenedenia melleni MacCallum)的形态特征,另有一些虫体介于二者之间;莆田和连江海区养殖的大黄鱼(Pseudosciaena crocea Richardson)体表以及厦门海区养殖的鮸状黄姑鱼(Nibea miichthioides Chu,Lo et Wu)体表的虫体,则基本上呈现梅氏新贝尼登虫的形态特征,少数表现为鱾新贝尼登虫的特征。 2.采用数量形态学方法,对N.melleni、N.girellae、N.pargueraensis Dyer,Williams and Bunkley-Williams、N.adenea Meserve和N.isabellae Meserve等5种新贝尼登虫12个易于观察和测量的形态特征进行主成分分析和聚类分析,确定了对形态鉴定贡献较大的7个特征,分别是后吸器的横轴和纵轴长、体宽和体长及前钩长、前吸盘横轴长和咽横轴长等。这些形态特征是种属划分的重要参数,在分类鉴定中应对它们重点考察,综合分析。采用最小距离法作出聚类图,形态上非常相近的两个虫种,N.melleni和N.girellae表现出很近的亲缘关系,于距离0.555处最先聚合。 3.应用RAPD技术,采用30个随机引物对不同海区不同宿主的梅氏新贝尼登虫进行遗传分析。结果表明,寄生于厦门海区不同鱼类宿主(高体鰤和鮸状黄姑鱼)上的梅氏新贝尼登虫的遗传差异为0.073,小于生存于不同海区(连江和莆田)同一宿主大黄鱼鱼体上梅氏新贝尼登虫0.094的遗传差异。RAPD结果还显示,鱾新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫两个虫种间的遗传相似性高达83.1~94.7%,只有5.3~16.9%的遗传差异,接近于梅氏新贝尼登虫种内7.3~15.4%的遗传差异。 4.通过特异性引物经PCR反应扩增出鱾新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫的部分28S rDNA基因,获得350bp左右的目的DNA片段。测序后进行排序比较,发现鱾 摘要新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫的遗传相似度高达99.7%,在337hp同源序列中仅存在一个碱基的差异。而同为梅氏新贝尼登虫,莆田海区养殖大黄鱼鱼体上和厦门海区养殖高体狮鱼体上虫体的遗传相似度为99.41%。经与3种贝尼登虫的同源序列比较后发现,贝尼登属三个虫种Benedenia luijani、B.rohdei和 B.seriolae禾间的遗传差异为二刀8~11厂3%,甚至大于妃新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫 0.3%的差异,结果与RAPD分析相似,进一步在分子水平上印证了妃新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫应为同一虫种的观点。 在此基础上,作者比较了单后盘目3个科10个属12个虫种的285 rDNA基因同源序列,结果显示虫种间的遗传距离介于2.15叫2.08O,属间的距离为5.18+0.43O,科间的距离为 19厂0~29刀9%。以 MP和 UPGMA方法作出的分子系统进化树与传统分类系统基本一致,但两者在科的水平上有所不同,MP系统树为以 CaPsalidae,MOllOCOtylld8C),UdollCllid。e),UPGMA系统树为((CapS&lid3C,UdollCllid8C)Monocotylidae人 285 rDNA基因的该序列片段被证明非常适于单殖吸虫的分子系统学研究。
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