【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒引起的猪的一种高度传染病,主要以妊娠母猪发生早产、流产、死胎、木乃伊胎、弱胎及
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒引起的猪的一种高度传染病,主要以妊娠母猪发生早产、流产、死胎、木乃伊胎、弱胎及各年龄猪特别是仔猪的呼吸道疾病为特征。自1987年美国首次发现以来,现已遍及世界各主要养猪国家与地区,给世界养猪业造成了严重经济损失,因此国际兽疫局将其列为B类传染病,我国将其列为二类传染病。GP5蛋白是PRRSV的主要结构蛋白,可诱导产生中和抗体,因此GP5蛋白基因是研究PRRSV新型疫苗的主要目的基因。本研究根据PRRSV基因组GP5基因序列,设计合成三对引物,应用RT-PCR扩增PRRSV CH-1a株GP5蛋白基因,将目的片段克隆至pMD-18T载体,亚克隆构建三种质粒,分别为真核表达质粒pcDNA3.1-GP5和原核表达质粒pGEX-GP5、穿梭质粒pSC11-GP5。WR株牛痘病毒(CPV)感染TK143细胞后,用pSC11-GP5转染TK~-143细胞,与牛痘病毒进行同源重组。在含有X-gal的琼脂培养基上进行蓝斑筛选,最终获得了含有PRRSV GP5基因的重组牛痘病毒(rWR-PRRSV-GP5)。分别以rWR-PRRSV-GP5、pcDNA3.1-GP5免疫小鼠,分离血清,以原核表达质粒pGEX-GP5表达的蛋白为抗原,进行间接ELISA检测,结果显示所构建的重组牛痘病毒rWR-PRRSV-GP5与真核表达质粒pcDNA3.1-GP5在小鼠体内可诱导特异性抗体产生。同时应用Prime boost免疫策略免疫小鼠,ELISA结果表明这种免疫方法所产生的特异性抗体水平明显高于单一免疫,这为新型疫苗的和Prime boost免疫策略的应用奠定了基础。
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