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研究目的:成人胰岛细胞移植是治疗1型糖尿病(T1DM)有效的途径。免疫抑制药物对胰岛细胞的毒性作用是阻碍临床广泛开展成人胰岛移植的主要原因之一。本文旨在探讨免疫抑制药物对体外培养的成人胰岛细胞产生毒性作用的机制,并试图寻找合理的防治措施。 研究方法:1.按照胰岛分离、纯化的改良方法(Ricordi chamber)进行成人胰岛细胞的分离和纯化,利用DTZ染色法鉴定胰岛纯度、AO-PI荧光染色法鉴定胰岛活率,并完成胰岛的体外培养。2.选择临床常用或即将使用的免疫抑制药物(MP、CsA、FK506、MPA、Rapa、FTY720),分别以不同浓度与体外分离、纯化后的成人胰岛共培养,24h后透射电镜下观察胰岛形态学改变、MTT法检测胰岛活力、胰岛素释放试验检测胰岛功能。3.选择胰岛移植中使用或可能使用的免疫抑制药物(FK506、MPA、Rapa、FTY720),以较高浓度与烟酰胺(NAA,10mmol/1)、己酮可可碱(PTX,5mmol/1)及胰岛共培养,3d后检测培养液上清中的TNFα含量、进行胰岛素释放试验、TUNEL法检测胰岛细胞凋亡。4.核因子κB(NF-κB)的抑制剂PDTC、上述四种免疫抑制药物、成人胰岛共培养,3d后进行胰岛素释放试验及凋亡检测,并利用EMSA法检测胰岛细胞核内NF-κB的活性。 研究结果:1.研究中,分离、纯化后的成人胰岛纯度为95%左右,活率为98%左右,体外培养中生长良好。2.透射电镜下,可以看到与药物共培养后,胰岛细胞出现明显凋亡现象;除了FTY720以外,其他免疫抑制药物均引起MTT法检测中胰岛活力的下降(p<0.01);MP、CsA、FK506、MPA较为明显地抑制了体外培养胰岛的功能,Rapa和FTY720对胰岛功能的影响较小。3.FK506及Rapa可以增强胰岛细胞TNFα的分泌,NAA对此无明显影响(p>0.05),但可以抑制FK506及MPA导致的凋亡,对胰岛功能有保护作用;PTX可以抑制FK506引起的胰岛细胞凋亡,改善胰岛功能,但对MPA和FTY720引起的胰岛损伤没有保护作用。4.PDTC可以抑制所有免疫抑制药物作用下胰岛细胞的凋亡和功能损伤,对胰岛有保护作用。