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目的:肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是引起社区获得性肺炎最主要的病原体。目前宿主对Mp感染引起的急、慢性炎症反应的调控机制尚不清楚。干酪乳杆菌是一种常见肠道益生菌,可调节肺组织炎症反应。论文拟探讨肠道补充干酪乳杆菌对Mp感染小鼠肺组织支原体载量、肺部炎症、肺泡巨噬细胞活化及脾淋巴细胞分泌细胞因子的影响,初步了解肠道补充干酪乳杆菌对小鼠肺炎支原体感染引起的炎症反应的调节,为支原体肺炎的治疗提供潜在的靶点及新思路。方法:6~8周龄C57BL/6J小鼠连续7天通过灌胃的方式补充200μL含1.0×10~9菌落形成单位(Colony-Forming Unit,CFU)的干酪乳杆菌活菌,第8天用1×10~7 CFU的Mp滴鼻感染小鼠。Mp感染后第3天和第10天分别处死小鼠,收集肺组织、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、血清和脾淋巴细胞等标本。用PPLO固体培养计数和实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测小鼠肺组织匀浆中Mp载量;免疫组化检测肺组织中Mp抗原。肺组织病理切片进行苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,分析小鼠肺组织的病理改变,并用双盲法进行肺组织病理评分;血液和BALF涂片后进行瑞氏染色,显微镜下进行细胞分类计数;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肺组织匀浆上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)和IL-4的表达水平。逆转录实时荧光定量PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定M1型巨噬细胞活化标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、TNF-α和CXC趋化因子1(chemokine ligand 1,CXCL1)基因的mRNA相对转录水平,M2型巨噬细胞活化标志物精氨酸酶1(Arginase-1,Arg1)和壳多糖酶3样蛋白3(chitinase-3-like-3,Chi3l3)基因的mRNA相对转录水平;蛋白质免疫印迹(western blot)测定iNOS和Arg1的蛋白含量;流式细胞术检测Mp感染第10天小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ和IL-4的CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的百分比;间接ELSIA测定小鼠血清Mp特异性IgM、IgG及其亚类IgG1和IgG2a的表达水平。结果:(1)Mp感染后第3天,与对照灌饲PBS组小鼠相比,灌胃补充干酪乳杆菌组小鼠肺组织中Mp的载量较对照组显著减少,lg(CFU/肺)为3.34±0.14 vs3.71±0.23,P<0.05);qPCR检测结果与培养结果一致,lg(CFU/肺)为3.39±0.14 vs 3.61±0.02,P<0.001);Mp感染后第3天和第10天,免疫组化检测结果显示补充干酪乳杆菌组小鼠肺组织中Mp抗原较对照组明显减少(P<0.001)。(2)Mp感染后第3天,与对照组小鼠相比,补充干酪乳杆菌组小鼠肺组织炎症病理评分较对照组降低(4.30±0.47 vs 5.60±0.49,P<0.05);外周血中性粒细胞增多(17±0.82%vs 9.75±0.4%,P<0.001);BALF中淋巴细胞和中性粒细胞百分比增高(75±2.36%vs 70±1.60%,P<0.05;17±2.16%vs 11.33±0.47%,P<0.001);肺匀浆中TNF-α的表达水平增加(3.08±0.28pg/mL vs 2.58±0.18pg/mL,P<0.05)。Mp感染后第10天,两组病理学评分差异无显著性(P>0.05);肠道补充干酪乳杆菌组小鼠外周血中性粒细胞较对照组增多(16±1.41%vs11±0.7%,P<0.001);两组BALF中淋巴细胞和中性粒细胞差异无显著性(P>0.05);与对照组小鼠相比,补充干酪乳杆菌组小鼠肺匀浆中TNF-α的表达水平增加(1.49±0.15 pg/mL vs 1.13±0.07 pg/mL,P<0.01),IL-1β的表达水平降低(8.21±0.33pg/mL vs 11.87±2.60pg/mL,P<0.001)。(3)感染后第3天,补充干酪乳杆菌组小鼠肺组织匀浆中IL-4的表达水平较对照组小鼠降低(2.7±0.4pg/mL vs 3.3±0.46pg/mL,P<0.05),两组小鼠肺组织中IFN-γ的表达水平差异无显著性(P>0.05);肠道补充干酪乳杆菌组小鼠肺组织匀浆中iNOS、TNF-α和CXCL1基因的mRNA相对转录水平增加(P<0.001、P<0.05和P<0.05),Arg1基因的mRNA相对转录水平减少(P<0.05),两组Chi3l3的mRNA基因的相对转录水平表达差异无显著性(P>0.05);肺组织匀浆中iNOS蛋白的表达增加(P<0.001),Arg1蛋白表达水平降低(P<0.001)。Mp感染后第10天,肠道补充干酪乳杆菌组小鼠较对照组小鼠肺组织匀浆中iNOS(P<0.05)和TNF-α(P<0.05)基因的mRNA相对转录水平增加,Chi3l3基因的mRNA相对转录水平降低(P<0.001),两组Chi3l3和Arg1基因的mRNA相对转录水平差异无显著性(P>0.05);肺组织匀浆中iNOS蛋白的表达增加(P<0.001)而Arg1蛋白的表达降低(P<0.001)。(4)感染后第10天,脾脏中分泌IL-4的CD4~+T和CD8~+T细胞的百分比降低(0.24±0.05%vs 0.45±0.09%,P<0.01;1.53±0.22%vs2.41±0.60%,P<0.01),分泌IFN-γ的CD8~+T细胞比值增高(3.44±0.27%vs 2.18±0.69%,P<0.01);与对照组相比,肠道补充干酪乳杆菌组CD4~+T细胞内IL-4/IFN-γ的比值降低(t=9.424,P<0.001),肠道补充干酪乳杆菌组CD8~+T细胞内IL-4/IFN-γ的比值与对照组相比同样降低(t=7.188,P<0.001);两组特异性IgM,IgG及其亚类IgG1和IgG2a的水平无明显差异(P>0.05)。结论:(1)肠道补充干酪乳杆菌可促进小鼠对Mp的清除,减轻Mp感染引起的小鼠肺组织炎症;(2)肠道补充干酪乳杆菌可以促进Mp感染小鼠M1型肺泡巨噬细胞的活化及抑制Th2型免疫。