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利用烟草不同栽培类型间品种烤烟台烟7号和白肋烟白肋21进行杂交,构建了F2遗传作图群体,通过ISSR、SRAP、标准RAPD和双引物RAPD标记多态性引物的PCR扩增和遗传连锁分析,构建了一张烤烟×白肋烟(栽培类型间)分子标记遗传连锁图,主要研究结果如下:
(1)以烤烟台烟7号和白肋烟白肋21杂交,F1自交获得187株F2代分离群体作为作图群体。
(2)从19×27对SRAP上游与下游引物组合、42个ISSR引物、126个RAPD引物和数个PAPD双引物组合对中,以台烟7号和白肋21为模板筛选出58对多态性较好的SRAP引物组合、10个多态性较好的ISSR引物、11个多态性较好的RAPD引物和51个多态性较好的RAPD双引物组合对。
(3)利用SRAP、ISSR、标准RAPD和双引物RAPD四种分子标记筛选出了130个引物组合及引物,对F2作图群体进行PCR扩增,共产生218条多态条带,平均每个引物组合产生1.7个多态条带,最多的可以产生6条多态性条带。
(4)使用MAPMAKER/EXP Version3.0b和MapDrawV2.1软件,我们构建了包括97个SRAP标记位点、21个ISSR标记位点17个RAPD标记位点和67个RAPD双引物标记位点的烟草遗传连锁图,202个标记进入25个连锁群(LOD≥3.0),另有16个标记未进入连锁群。该图谱总长为4007.1cM,标记位点平均间距为19.8cM。标记间的最大距离为48.4cM,最小距离为0cM,每个连锁群上的标记数在2-40个之间,连锁群的长度在0-616.6cM之间。