宇佐美曲霉phyA基因的克隆与表达

来源 :首都师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zhangduanhua870505
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植酸酶(phytase,phyA)是催化植酸及其盐类物质水解成肌醇和磷酸的一类酶的总称。它能促进单胃动物对磷的吸收;能使饲料中磷的利用率提高50%左右;同时它还能将与多种金属离子和蛋白质螯合的植酸磷降解;此外它还具有促进动物生长、保护生态环境等作用,因而在饲料、食品和医药工业以及环保等方面都具有重要的现实意义和潜在的应用价值。 多种微生物如细菌、丝状真菌、酵母等都能产生植酸酶,但由于很难找到一种产酶量很高的天然产植酸酶菌株和植酸酶的热稳定性问题一直不能得到很好的解决,所以目前植酸酶在饲料中并没有得到广泛的推广和应用。 本研究根据已发表的植酸酶phyA基因全序列设计了两对引物,用PCR方法从宇佐美曲霉总DNA中扩增到去除信号肽和内含子后约1.3kb的phyA基因编码区片段,对该片段进行了克隆及序列测定。通过选用功能强大的原核表达载体pET32a+和真核表达载体pMETαA,构建了Ecoli.BL21-pET32a+-phyA表达载体和酵母PMAD16-pMETαA-phyA,以期得到大量高活性、耐酸性和热稳定性好的重组植酸酶,为开发含植酸酶的新型、多功能微生态制剂提供基础数据和科学依据,将为今后研究和开发多功能微生态制剂,实现畜牧业综合化、环保化发展等应用研究奠定坚实的基础。
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