驱动蛋白分子是一类以微管(Microtubules, MTs)为轨道进行运动的分子马达。该蛋白分子具有ATP酶活性,能水解ATP并将化学能转化为动能。因此,驱动蛋白分子在细胞生长增殖分裂迁移过程中发挥多种重要作用,参与定向运输细胞内细胞器、生物大分子,维持细胞骨架结构。驱动蛋白分子KIF14(Kinesin family member 14, KIF14)在细胞有丝分裂末期,对顺利形成中小体以及最后的细胞分裂至关重要,应用siRNA干涉KIF14时,细胞不能形成完整中小体,并且无法对细胞进行最后的切割,最终形成多核细胞,但KIF14在其中的具体功能还不清楚。本论文由两部分组成,论文第一部分主要探究驱动蛋白分子KIF14,我们通过对内源性KIF14进行免疫荧光染色来明确其定位,并对其进行敲降,证实KIF14不仅参与胞质分裂过程而且参与染色体整列。同时通过对同步化细胞进行免疫印迹实验,发现晚期有丝分裂(late mitosis)细胞条带明显上移,推测KIF14在调节细胞有丝分裂过程中,存在蛋白翻译后修饰。我们还构建了驱动蛋白KIF14不同结构域的表达载体,转染至细胞后观察其定位,发现其N末端延伸区决定KIF14在细胞有丝分裂末期定位于中小体,这为阐明中小体的切割机制奠定基础。论文的第二部分主要探讨着丝粒相关蛋白CENP-E的多克隆抗体的制备。我们应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒pHis-CENPEC410,诱导表达His-CENPEC410融合蛋白,用Ni-NTA柱子亲和层析法纯化His-CENPEC410蛋白,将其作为抗原免疫新西兰大白兔,制备特异性CENP-E多克隆抗体。之后对免疫抗体血清用免疫印迹法(Immunoblotting)和免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)法进行检测,纯化的抗体用免疫荧光染色(Immunofluorescene,IF)法检测。抗体血清可以较好的应用于免疫印迹和免疫共沉淀等实验,纯化的抗体可以应用于免疫荧光染色。因此我们获得了具有较高特异性和灵敏度的CENP-E多克隆抗体,为后续CENP-E蛋白的研究奠定了基础。