【摘 要】
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目的:通过观察活血补肾方对大鼠退变椎间盘内mTOR信号通路介导下自噬的影响,阐明活血补肾方的作用机制。材料与方法:将60只SD大鼠随机等分为对照组、模型组、雷帕霉素组、活血补肾方组、活血补肾方联合雷帕霉素组5个组别。除对照组外,其余4组均使用去前肢诱导动静力失衡法建立大鼠腰椎间盘退变动物模型。建模成功后,各组按照组名分别予活血补肾方灌胃、雷帕霉素腹腔注射、生理盐水灌胃、二甲基亚砜腹腔注射进行相对应
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目的:通过观察活血补肾方对大鼠退变椎间盘内mTOR信号通路介导下自噬的影响,阐明活血补肾方的作用机制。材料与方法:将60只SD大鼠随机等分为对照组、模型组、雷帕霉素组、活血补肾方组、活血补肾方联合雷帕霉素组5个组别。除对照组外,其余4组均使用去前肢诱导动静力失衡法建立大鼠腰椎间盘退变动物模型。建模成功后,各组按照组名分别予活血补肾方灌胃、雷帕霉素腹腔注射、生理盐水灌胃、二甲基亚砜腹腔注射进行相对应的处置。给药6周后处死大鼠,取L5/6椎间盘作为样本。所取样本分别进行HE染色、阿尔新兰-核固红染色,进行椎间盘组织形态学镜下观察;使用Western-Blot检验mTOR信号通路下游4E-BP1和p70S6K以及自噬相关蛋白beclin-1和lc-3b的表达情况。结果:1.椎间盘组织形态学观察显示,镜下椎间盘退变程度为:模型组退变最严重,对照组退变最为轻微,雷帕霉素组、活血补肾方组和活血补肾方联合雷帕霉素组三者水平类似,介于二者之间。细胞外基质中蛋白聚糖含量情况为:对照组含量最高,活血补肾方联合雷帕霉素组相较对照组略少,雷帕霉素组和活血补肾方组次之且两者差异不明显,模型组含量最低。2.mTOR信号通路下游蛋白检测显示:p70S6K表达水平由高到低依次为:模型组>雷帕霉素组及活血补肾方组>活血补肾方联合雷帕霉素组。4E-BP1表达水平由高到低依次为:模型组>活血补肾方组>雷帕霉素组及活血补肾方联合雷帕霉素组。活血补肾方和雷帕霉素均能对椎间盘内mTOR信号通路下游p70S6K和4E-BP1的合成起到抑制作用。自噬相关蛋白检测显示:beclin-1表达水平由高到低依次为:活血补肾方联合雷帕霉素组>活血补肾方组>雷帕霉素组>模型组>对照组。lc-3b表达水平由高到低依次为:活血补肾方联合雷帕霉素组>活血补肾方组>雷帕霉素组>模型组>对照组。活血补肾方及雷帕霉素均能提高模型大鼠椎间盘内自噬相关蛋白表达水平。结论:活血补肾方能够通过抑制椎间盘内mTOR信号通路的活化程度,减少mTOR信号通路对自噬的抑制,在一定程度上提高椎间盘内的自噬水平,从而达到延缓去前肢诱导动静力失衡大鼠腰椎间盘退变的目的。
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