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[目的]本项目拟提取SGC-7901人胃癌间质液(不含SGC-7901细胞),对SGC-7901人胃癌细胞株体外培养及SGC-7901荷瘤裸鼠干预,观察其对SGC-7901人胃癌细胞及裸鼠移植肿瘤生长的影响,并检测SGC-7901人胃癌间质液干预后对SGC-7901裸鼠皮下移植瘤中microRNA21(miR-21)表达的影响;消痰散结方干预SGC-7901原位移植荷瘤鼠,并对肿瘤组织中miR-21进行检测,探讨从痰论治胃癌的分子机制。[方法]1.SGC-7901胃癌间质液的提取与鉴定。运用离心过滤方法对SGC-7901人胃癌组织混悬液进行处理,得到SGC-7901胃癌间质液,并用HE染色病理方法对提取的SGC-7901胃癌间质液进行鉴定,观察是否含有肿瘤细胞;ELISA法检测提取的不含肿瘤细胞的肿瘤间质液与过滤前肿瘤组织混悬液中IL-8、ICAM-1含量并作比较对比分析;检测提取的不含肿瘤细胞的肿瘤间质液与过滤前肿瘤组织混悬液中miR-21含量是否存在差异,并与正常裸鼠胃组织进行对比分析。2.消痰散结方对体外SGC-7901人胃癌细胞生长增殖的作用。用不同浓度SGC-7901胃癌间质液(0.5g/ml.0.05g/ml.0.005g/ml),在37。C,5%CO2浓度培养箱内培养SGC-7901人胃癌细胞,分别在24h、48h、72h观察对SGC-7901细胞增殖影响;制备消痰散结方中药血清和空白对照药物血清;将胃癌间质液(0.5g/m1)培养处理的胃癌细胞,给予消痰散结方中药血清干预,CCK-8方法检测消痰散结方中药血清对胃癌细胞生长增殖的影响。3.肿瘤间质液对SGC-7901人胃癌实体瘤生长的影响。30只实验裸鼠,随机分为3组,即:空白组、生理盐水组、胃癌间质液组;间质组及生理盐水组均于术后第三天开始,于皮下移植SGC-7901胃癌部位注射细胞间质和生理盐水,每周注射两次(0.4ml/次、共4周、8次),空白组术后无任何干预,对比观察肿瘤生长情况;第28天麻醉处死裸鼠,比较瘤重,同时检测不同组肿瘤组织中miR-21含量。4.消痰散结方对SGC-7901人胃癌原位移植荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用机制。7周龄、40只裸鼠,SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植荷瘤鼠模型建立,随机分为空白组、生理盐水组、替加氟化疗组、消痰散结方组;观察消痰散结方对SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植瘤生长的影响及各组肿瘤组织中miR-21含量。[结果]1.SGC-7901胃癌间质液的提取与鉴定:运用离心过滤方法对SGC-7901人胃癌肿瘤组织混悬液进行处理,得到的SGC-7901人胃癌间质液,HE染色病理结果表明其中不含肿瘤细胞;过滤前与过滤后的IL-8、ICAM-1含量无差异(P>0.05),均高于正常组(P<0.05);过滤前与过滤后miR-21含量亦呈无差异(P>0.05),均高于正常组(P<0.05)。2.消痰散结方对体外SGC-7901人胃癌细胞生长增殖抑制作用:给予不同浓度的胃癌间质液培养胃癌细胞,CCK-8法检测细胞增殖率显示:不同时间各组OD值差异有统计学意义(P<0.05),在时间上存在浓度递增关系,SGC-7901肿瘤细胞的浓度与所加入的肿瘤间质液浓度存在浓度的依赖性。连续培养72小时间质液组对SGC-7901肿瘤细胞可见明显增殖作用,高浓度组最明显;消痰散结方中药血清可明显抑制胃癌间质液(0.5g/ml,培养72h)对胃癌细胞的促生长作用,与对照组和空白药物血清组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。3.肿瘤间质液促进SGC-7901人胃癌实体瘤生长:3.1不同组别瘤重比较:肿瘤旁注射SGC-7901人胃癌间质液组与生理盐水干预组、模型组瘤重比较,三组间比较总体差异有统计学意义P<0.05(P=-0.0337)。进一步组间两两比较,结果表明,胃癌间质液干预组裸鼠瘤重与空白组、生理盐水组裸鼠瘤重差异比较均有统计学意义(P<0.05),空白组与生理盐水组两组间比较瘤重差异无统计学意义(P>0.05)。3.2SGC-7901人胃癌间质液对SGC-7901人胃癌裸鼠皮下移植荷瘤鼠净重的影响:荷瘤鼠体重减去瘤后称取去瘤后净重,三组间比较净重差异有统计学意义(P<0.05,P=0.0436),进一步组间两两比较,结果表明空白组及生理盐水组荷瘤裸鼠去瘤后净重与间质液干预组比较净重差异均有统计学意义(P<0.05)3.3SGC-7901胃癌间质液干预皮下移植肿瘤组织中miR-21的结果:胃癌间质液干预组与空白组、生理盐水组比较三组间miR-21表达差异有统计学意义(P<0.001,P=0.0001)胃癌间质液组miR-21表达明显高于生理盐水干预组及空白组。4.消痰散结方对SGC-7901人胃癌原位移植荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用:4.1消痰散结方对SGC-7901人胃癌原位移植裸鼠肿瘤的抑瘤率:空白组、生理盐水组、消痰散结方组、化疗组四种不同的干预方式,计算抑瘤率,消痰散结方组的抑瘤率46.24%,化疗组的抑瘤率43.15%4.2消痰散结方对SGC-7901人胃癌原位移植裸鼠肿瘤组间瘤重比较:空白组、生理盐水组、消痰散结方组、化疗组总体组间瘤重差异有统计学意义(P<0.001,P=0.0001),进一步组间两两比较,消痰散结方组瘤重(1.198±0.344)与化疗组瘤重(1.267±0.425)差异无统计学意义(P>0.05),但两组瘤重均低于生理盐水组及模型组,且瘤重差异有统计学意义(P<0.05)。4.3消痰散结方干预SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植瘤组织中miR-21的结果表明:空白组、生理盐水组、化疗组、消痰散结方组,4组miR-21表达差异有统计学意义(P=0.0005<0.001),进一步组间两两比较,化疗组与空白组miR-21表达差异有统计学意义(P<0.05),化疗组与生理盐水组比较、消痰散结方组与生理盐水组比较miR-21表达差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.通过对所提取的SGC-7901胃癌间质液进行鉴定,并检测其中代表物质sIC AM-1、 IL-8、miR-21含量与过滤前的肿瘤组织混悬液中sIC AM-1、IL-8、miR-21表达无差异;结果表明,提取的不含胃癌细胞的间质液,能够代表原SGC-7901胃癌中间质液。2.SGC-7901胃癌间质液(痰浊)能够促进体外培养SGC-7901人胃癌肿瘤细胞增殖,并呈浓度依赖性;消痰散结方中药血清可明显抑制胃癌间质液对胃癌细胞的促增殖作用。3.SGC-7901胃癌间质液(痰浊)能够促进皮下移植肿瘤的生长,同时SGC-7901胃癌间质液干预组能上调肿瘤组织中miR-21表达;4.痰浊(胃癌间质液)能够影响裸鼠净重,使其净重下降,表明肿瘤间质液——痰浊是机体内的恶液质,正是肿瘤患者机体内存在这种病理物质,可以推测正是由于此导致患者生存质量下降。5.消痰散结方对SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植荷瘤鼠干预结果表明:消痰散结方能抑制SGC-7901人胃癌裸鼠原位移植肿瘤生长;同时降低肿瘤组织中miR-21的表达。