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目的：转铁蛋白受体（Transferrin Receptor，TfR）是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白受体，在肝癌等众多恶性肿瘤细胞表面表达明显上调，有望成为肿瘤靶向诊断和治疗的新靶点。本研究以99mTc标记抗TfR单克隆抗体（99mTc-anti-TfR-mAb）为分子探针，通过荷瘤裸鼠的SPECT放射免疫显像，评价探针的靶向性、体内分布特性，为肿瘤的早期靶向诊断提供新思路。 方法：1.采用间接标记法，以NHS-HYNIC为双功能螯合剂、Tricine为协同配体进行anti-TfR-mAb的99mTc标记，以比色反应法测定联接到anti-TfR-mAb上的HYNIC的数目，标记产物以PD10脱盐柱纯化，计算99mTc-anti-TfR-mAb的标记率，以ITLC-SG纸层析法测定放化纯和体外稳定性，以还原及非还原PAGE法鉴定99mTc-anti-TfR-mAb的分子量及完整性。 2.体外培养人肝癌HepG2细胞，流式细胞术（FCM）检测anti-TfR-mAb与HepG2细胞的结合情况。HepG2细胞接种于24孔板中，进行99mTc-anti-TfR-mAb的体外细胞结合实验，包括：细胞饱和结合实验、竞争抑制实验及内化实验。 3.BALB/c-nu裸鼠右下肢皮下接种HepG2细胞，构建荷瘤裸鼠模型。尾静脉注射99mTc-anti-TfR-mAb（37MBq，10μg），于相应时间点（1，3，6，9，12及24h）进行SPECT实验组肿瘤显像，对照组（阻断）裸鼠先尾静脉注射1mg非标记的anti-TfR-mAb（100倍于99mTc-anti-TfR-mAb）再注射99mTc-anti-TfR-mAb。随之于相应时间点处死动物，收集肿瘤及其它正常组织器官进行生物学分布实验，并通过感兴趣区（ROI）勾画技术，计算肿瘤与对侧肌肉组织的放射性计数T/M比值。显像结束后，取肿瘤及肌肉组织以冰冻切片机制作快速冰冻切片，进行磷屏放射性自显影成像，免疫荧光组织化学，进一步验证肿瘤中TfR的表达。 结果：1.每分子anti-TfR-mAb联接的HYNIC数目为5.2，99mTc-anti-TfR-mAb标记率为（87.5±3.8）％，放化纯达（96.8±1.0）％以上，比活度是（7.02±1.13）MBq/μg，在正常人血清和生理盐水中24h体外稳定性分别为（93.14±2.00）％、（91.15±0.96）％。还原及非还原PAGE证实99mTc-anti-TfR-mAb与非标记anti-TfR-mAb的分子量一致，保持了蛋白的完整性。 2.体外细胞饱和结合实验结果表明，随着99mTc-anti-TfR-mAb浓度的增加，细胞结合率逐渐增加，最后逐渐趋于饱和，HepG2细胞特异性结合的解离常数Kd值为5.91nM，最大结合容量Bmax为28.79×10-18mol/cell，每个细胞表面结合的TfR分子数为3.6×106个。竞争抑制细胞结合实验证实，随着非标记anti-TfR-mAb浓度倍数的增加，细胞结合率逐渐降低。细胞内化实验结果提示，当99mTc-anti-TfR-mAb浓度为0.5nM时，细胞总结合率为（55.59±0.29）％、细胞内化结合率为（39.15±0.76）％，细胞的内化结合是总结合的（70.43±1.48）％。 3.生物学分布结果亦表明99mTc-anti-TfR-mAb在肿瘤内的摄取随时间延长逐渐增多，在血液、肝脏、肺等其他器官呈逐渐下降趋势，24h肿瘤部位摄取达6.4±0.8％ID/g，明显高于对侧肌肉1.0±0.2％ID/g（P＜0.01，t=14.17）。荷瘤裸鼠体内显像证实，1h时肿瘤组织隐约显影，3h时肿瘤部位开始显影清晰，随时间延长，移植瘤部位放射性浓聚越来越明显，至24h时移植瘤显影最清晰，其肿瘤/肌肉（T/M）比值为11.4±1.6。对照组动物显像表明（非标记anti-TfR-mAb预阻断）各时间点肿瘤部位无明显显影，计数水平接近本底，24h的T/M比值仅为2.6±0.5（P＜0.01，t=﹣9.27），证实了99mTc-anti-TfR-mAb的特异性。肿瘤组织冰冻切片的放射自显影及免疫荧光染色可见放射性显影及TfR的表达，进一步印证了体内显像结果。 结论：99mTc-anti-TfR-mAb体外及体内实验证实，标记物体外稳定，其与结合肿瘤具有较好亲和力、靶向性及特异性，成像靶/非靶比值较高，有望用于肿瘤的早期诊断。