骨髓间充质干细胞来源的神经干样细胞对急性重症一氧化碳中毒大鼠脑结构和功能的重塑

来源 :浙江大学医学院 浙江大学医学部 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linxunchang
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目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的神经干样细胞(bone marrow mesenchymal stemcells-derived neural stem-like cells,MS-NSCs)对急性重症一氧化碳中毒大鼠脑结构和功能的影响,并对MS-NSCs和BMSCs进行移植后治疗效果的比较评价。方法体外分离90g大鼠长骨干内的BMSCs,运用全骨髓法贴壁培养,定时换液,祛除悬浮的血细胞和其它类干细胞如造血干细胞;运用生物因子的方法将BMSCs向MS-NSCs定向诱导,见克隆增生,并亦定时换液补充营养与能量;运用细胞免疫组化的方法监测两类干细胞在神经标志蛋白如神经特异性核蛋白(neuron-specific nuclearprotein,NeuN)、巢蛋白(nestin)、CD11b等表达与分泌情况;10μmol/l BrdU标记预移植的两类干细胞(BMSCs和MS-NSCs)。建立成年大鼠中毒模型并复苏24h后,将细胞经左颈内动脉移植入脑内,以神经功能严重度评分(neurological severity score,NSS)和Morris水迷宫试验(Morris Water Maze,MWM)评价脑功能的改善程度,5周后病理学上评价脑灰白质结构的重塑情况,包括H&E染色,髓鞘染色,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和2、3-环核苷酸磷酸二脂酶(2′3′-cyclic nucleotide 3′-phosphodiesterase,CNP)免疫组化染色,BrdU免疫组化染色,BrdU和神经标志蛋白如GFAP、CNP、CD11b及微管相关蛋白(microtubule-associatedprotein 2,MAP2)免疫荧光双染色等。结果重症CO中毒后5周,大鼠脑内白质存在局灶脱髓鞘现象,灰质如皮层、海马等处散在存在局灶坏死后腔隙;两类干细胞移植都能够改善白质结构的有序性和致密性及脱髓鞘情况,促进认知记忆功能的恢复,且这种功能恢复在MS-NSCs移植组中更明显(p<0.05);同时在皮层、海马、基底节局部受损区域和疏松白质内检测到BrdU阳性细胞,且在MS-NSCs移植组中此阳性细胞数更多(p<0.05)。同时MS-NSCs移植组中某些区域内干细胞向下游终末神经细胞分化的比例更高。结论MS-NSCs能重塑急性重症一氧化碳中毒大鼠的脑结构和功能,且这种作用较BMSCs更明显,提示前者可能是更佳的种子细胞。
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