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温度是决定物种分布和扩散的重要因素。B型烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是一种入侵性强的农业害虫,对高温逆境有很强的适应能力。本论文以B型烟粉虱为研究对象,在研究组前期工作积累的基础上,重点采用抑制消减杂交(SSH:suppression subtractive hybridization)、RNA干涉(RNAi:RNA interference)等分子生物学技术手段,对雌雄烟粉虱耐热性差异进行了深入研究。主要结果和结论如下:1.雌性烟粉虱比雄性耐热:高温(≧44℃)热激1h,雄虫的死亡率显著高于雌虫。2.筛选了雌性和雄性烟粉虱在高温热激下的差异表达基因:1)构建了44℃热激1h条件下的雌性SSH文库,并通过斑点杂交筛选获得50个差异表达的ESTs(Expression Sequence Tags)。其中有26(52%)条能与NCBI上的序列显著性匹配(E-value < 10-5),包括16个已知功能的ESTs,10个已报道但未知功能的ESTs,其余的24条为没有显著性匹配的序列(E-value > 10-5),为新发现的ESTs。这些差异表达的ESTs按其功能分类可分为四类:热胁迫相关的ESTs、新陈代谢相关的ESTs、已报道但功能未知的ESTs、以及未报道的新ESTs。2)构建了44℃热激1h条件下的雄性SSH文库,并通过斑点杂交筛选获得83个差异表达的ESTs。其中有42(50.6%)条能与NCBI上的序列显著性匹配(E-value < 10-5),包括31个已知功能的ESTs,11个已报道但未知功能的ESTs,而其余的41条没有显著性匹配的序列(E-value > 10-5),为新发现的ESTs。这些差异表达的ESTs按其功能分类可分为四类:热胁迫相关的ESTs、新陈代谢相关的ESTs、已报道但功能未知的ESTs、以及未有报道的新ESTs。此外,利用实时定量PCR对3个差异表达基因进行验证,从而确保所获得的差异表达基因的可靠性。3)这四类基因分别以不同的频率在雌雄库中出现:其中热胁迫相关的ESTs(雌性:30%;雄性:33.7%)、新陈代谢相关的ESTs(雌性:2.0%;雄性:3.6%)和新ESTs(雌性:48.0%;雄性:49.4%)在雌性中出现的频率比在雄性中出现的频率低,而已报道但功能未知的ESTs(雌性:20.0%;雄性:13.3%)在雌性中出现的频率较雄性的高。3.分析了不同温度热激下雌性和雄性烟粉虱hsp23, hsp70和hsp90 mRNA的表达动态:1)不同高温热激下,雌性和雄性烟粉虱Hsps(Heat shock proteins)基因(hsp23, hsp70和hsp90)mRNA表达动态基本相似:Hsps mRNA的表达量随着温度的升高而增加,当到达一定高温时,靶基因mRNA的表达量达到高峰;之后随着温度的升高,其表达量降低。雄性hsp70 mRNA的表达量在44℃到达高峰,而雌性hsp70 mRNA的表达量在42℃达到高峰;雌性和雄性hsp23和hsp90 mRNA表达量均在40℃达到高峰。2)不同高温热激下,雌性hsp23和hsp70 mRNA表达量高于雄性,但44℃条件下,雄性hsp70mRNA的表达量高于雌性;雌性和雄性hsp90 mRNA表达水平无显著差别。4. RNAi实验证明,hsp23和hsp70在雌性烟粉虱耐热中起关键作用,但在雄性中作用不明显;hsp90在雌性和雄性烟粉虱耐热中的作用均不明显:1)饲喂dsRNA 3h显著降低了雌性和雄性Hsps基因(hsp23, hsp70和hsp90)mRNA的表达水平。2)饲喂hsp23或hsp70 dsRNA 3h,然后置于44℃热激1h。与对照相比,雌性存活率显著降低,而雄性存活率无显著变化。3)饲喂hsp90 dsRNA 3h,然后置于44℃热激1h。与对照相比,雌雄的存活率均无显著变化。综上所述,雌性B型烟粉虱耐热是由多基因差异表达调控的。热激条件下,雌性烟粉虱通过调节体内的热激基因使之处于适量表达水平,从而保证了较高的存活率。hsp23和hsp70在此过程中起关键作用。