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背景与目的前列腺癌(prostate cancer,PCa)是世界范围内第二高发的男性恶性肿瘤,占男性癌症的15%,也是男性癌症相关的主要死亡原因之一。尽管近些年前列腺癌的诊断和治疗策略不断提升,患者的远期预后仍然较差。血清前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)作为临床最常用的前列腺癌筛检诊断和疗效监测指标,在疾病的早期阶段的诊断发挥了一定价值,但其缺乏一定的癌症特异性,在良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)、炎症等良性疾病中经常出现假阳性结果,容易导致对PCa患者的过度诊断以及伴随的过度治疗。尤其对于血清PSA水平在4.0-10.0ng/ml之间(即所谓的“灰色区域”)的患者,造成了高比例不必要的创伤性活检。因此新的、更灵敏的无创肿瘤标记物急需被发现。前列腺特异性抗原同源异构体 2(prostate-specific antigen isoform 2,p2PSA)是PSA的前体形式中肿瘤特异性最强的亚型,在PCa患者的血液中显著高表达。而前列腺健康指数(prostate health index,PHI)是结合了总 PSA(total PSA,tPSA)、游离PSA(free PSA,fPSA)和p2PSA的一项综合指标,被美国食品与药品管理局(FDA)批准作为一种辅助手段,用于诊断血清PSA水平在4.0-10.0 ng/ml之间,直肠指诊(digital rectal examination,DRE)阴性的PCa患者。研究表明PHI的对于灰区PCa患者的诊断价值优于tPSA等传统指标,可以有效减少不必要的创伤性活检。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度在19-23个核苷酸之间的内源性非编码RNA分子,在翻译水平上调控基因的表达。MicroRNA被证实在生物细胞的生长和增殖中发挥着重要的作用,并且通过调控癌基因和抑癌基因的表达参与了多种肿瘤的发生和进展。MiR-182是miR-183家族的一员,也是公认的“肿瘤相关miRNA”。既往的研究已经表明miR-182-5p在PCa组织中较癌旁组织显著上调,可能成为PCa早期诊断的潜在指标。本研究目的为检测miR-182和PHI在PSA灰区PCa患者及BPH患者血浆中的水平差异,分析二者对PCa早期诊断和危险分层的价值,并与传统的检测指标进行比较,分析诊断效能的优劣,以期为灰区PCa的早期诊断提供更多信息。材料与方法1、研究对象:收集郑州大学第一附属医院泌尿外科收治的PCa患者的血浆标本100例作为实验组,BPH的血浆标本标本50例作为对照组。纳入标准:患者血清PSA 水平在“灰区”(4.0-10.0ng/ml)之间,并经病理学穿刺确诊为PCa或BPH的患者。2、血浆miR-182相对表达量的检测:采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 PCa 组和 BPH组患者血浆标本中miR-182的相对表达量(2-△Cp)。3、血清tPSA及fPSA水平检测:由我院检验科肿瘤自免实验室进行,使用方法为电化学发光法。4、血浆p2PSA水平检测:采用贝克曼库尔特公司的p2PSA ELISA试剂盒进行检测。PHI计算公式为(p2PSA/fPSA)×√tPSA。5、统计学分析:采用SPSS 21.0和Graphpad Prism 7.0统计软件对miR-182和PHI进行数据的比较分析和图形绘制。对于两组定量样本的比较,采用两独立样本t检验或矫正t检验。各指标的诊断效力由受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线及曲线下面积(area under the curve,AUC)来评估,用MedCalc软件比较各指标AUC的差异。本研究所有统计分析均采用双侧检验,P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果1、miR-182在灰区PCa患者血浆中的表达水平显著高于对照组(0.084±0.031 vs 0.057±0.029,P<0.001),miR-182 诊断 PCa 患者的 AUC 为 0.728(95%CI:0.649-0.797),灵敏度与特异性分别为84.0%和52.7%。2、PCa组患者PHI的均值与对照组相比显著升高(50.78±21.82 vs 35.37±15.12,P<0.001),PHI 诊断 PSA 灰区 PCa 患者的 AUC 为 0.741(95%CI:0.653-0.830),灵敏度为 73.0%,特异性为 68.0%。3、miR-182和PHI诊断灰区PCa的AUC高于tPSA等传统指标,与tPSA相比差异具有统计学意义(P<0.05)。将各指标的灵敏度固定于85.0%时,miR-182和PHI的拥有更高的诊断特异性,参考二者分别可以使40(26.7%)、37(24.7%)例患者避免进行创伤性活检。miR-182和PHI的AUC相比差异无统计学意义(0.728 vs 0.741,P=0.821)。4、参考Gleason评分对PCa组患者进行分组,高分组(GS≥7)患者PHI、p2PSA的水平显著高于低分组(GS≤6)(P<0.05),这说明PHI一定程度上可以预测PCa的恶性程度和侵袭性,而miR-182在两组中的差异无统计学意义(P=0.154)。5、联合miR-182和PHI诊断灰区PCa的灵敏度为69.3%,特异性为80.0%,AUC可达到0.802(95%CI:0.729-0.862),高于两者单独检测的AUC且差异具有统计学意义(P<0.05),这表明二者具有一定的协同作用。结论1、miR-182在灰区PCa患者的血浆中的表达量显著升高,可做为诊断PSA灰区PCa患者的潜生物标志物2、PHI的值在灰区PCa患者中显著升高,且其升高程度与PCa的恶性程度相关。3、与传统的tPSA等指标相比,miR-182和PHI具有更高的诊断效力与特异性,作为PCa活检的参考指标有有望降低活检比例,改善PCa的过度诊断。4、miR-182联合PHI可以提高单一指标诊断的灵敏度和特异性,具有更高的诊断效力,这为灰区PCa患者的无创性诊断提供了新的思路。