尿酸与人脐静脉血管内皮细胞功能的体外研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mhj911
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背景:尿酸是嘌呤代谢产物,人类因基因突变而使人的血尿酸水平较其它哺乳动物高。近年发现血尿酸水平升高与临床多种系统性疾病特别是血管性、代谢性疾病有密切联系。临床流行病研究发现,人群中随血尿酸水平升高,心血管疾病和代谢综合征等的发病率随之升高。基础研究中对尿酸影响血管内皮细胞功能的观点分歧较大,或认为高尿酸通过抑制NO生成而引起血管内皮细胞障碍并最终启动动脉粥样硬化进程;或黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤和黄嘌呤生成尿酸的同时产生氧自由基而破坏了血管内皮细胞功能;或认为血尿酸更类似一种抗氧化物质,可以清除自由基,对内皮具有保护作用;或认为低浓度血尿酸对血管内皮有保护性作用,高浓度血尿酸对内皮特别是已经损伤的内皮有加速破坏的作用。目的:通过不同浓度尿酸(UA)对人体脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外刺激,测定氧化产物ROS和抗氧化反应中人内皮细胞一氧化氮合成酶(eNOS) mRNA的表达情况,初步测定体外一定浓度尿酸刺激血管内皮细胞一定时间后,对内皮细胞功能的影响。方法:MTT细胞活力检测实验测定不同时间经不同浓度尿酸培养HUVEC之间活力的差异;共聚焦荧光显微镜检测不同浓度尿酸刺激HUVEC 48小时后细胞ROS的表达;流式细胞仪检测不同浓度尿酸刺激HUVEC 48小时后细胞ROS的表达;RT-PCR检测不同浓度尿酸刺激HUVEC 48小时候后eNOS mRNA的表达水平;Real-Time PCR检测不同浓度尿酸刺激HUVEC 48小时候后eNOS mRNA的表达水平。结果:在不同浓度尿酸(0、5、10、20和30mg/dL)中培养不同时间(8、12、24和48h)之后,MTT检测发现第8h和12h时各个尿酸浓度组HUVEC的活力之间没有差异,第24h和48h时各个尿酸浓度组HUVEC的活力较对照组有显著降低(P<0.05)。HUVEC经体外不同浓度尿酸(0、5、10、20和30mg/dL)刺激48h后,经激光共聚焦显微镜检测发现HUVEC胞浆中DCFDA探针标记的ROS表达灰度强度与尿酸刺激浓度呈显著正相关(P<0.001)。同时HUVEC经体外不同浓度尿酸(0、5、10、20、30mg/dL)刺激48h后,采用RT-PCR检测细胞中eNOS mRNA的表达,发现eNOS mRNA的表达强度与尿酸培养浓度亦呈显著正相关(P<0.05)。结论:初步研究发现,体外HUVEC在不同浓度尿酸中培养不同时间后,MTT法测得第24h和48h时各个尿酸浓度组HUVEC的活力较对照组有显著降低。体外实验中,随着外源性尿酸浓度升高,HUVEC胞浆中ROS的表达程度升高,提示高浓度外源性尿酸刺激对HUVEC内皮细胞功能可能具有损伤作用。体外HUVEC被不同浓度尿酸刺激后eNOS mRNA表达增加,不排除是机体对尿酸激活ROS后产生的抗氧化反应所致。
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