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博来霉素水解酶(Bleomycin hydrolase, BLH)属于木瓜蛋白酶类,除了使博来霉素脱氨基失去活性而影响其肿瘤化疗的疗效,BLH也参与多种生理和病理机制。但BLH蛋白的降解机制尚不明确。本研究用抗肿瘤药物博来霉素、羟基喜树碱及鬼臼乙叉甙分别诱导人结肠癌HCT-116细胞和人子宫颈癌HeLa细胞凋亡,发现在凋亡细胞中BLH含量下降。Caspase广谱抑制剂Q-VD-oph和Caspase-3特异抑制剂Z-DEVD处理凋亡中的细胞发现BLH含量下降被抑制。表达重组BLH,Caspases体外处理检测BLH的切割条带变化,证实BLH被Caspase-3特异降解。研究还发现低浓度药物处理细胞能够引起BLH表达上调。此外,用蛋白合成抑制剂放线菌酮和蛋白酶体通路抑制剂MG132处理细胞后,发现BLH在细胞内比较稳定。综上所述,本研究证实BLH是一个比较稳定的蛋白,在凋亡细胞中被Caspase-3降解。肿瘤细胞多药耐药性往往导致肿瘤化疗的失败,应用药物抑制外排泵蛋白的功能,能够逆转肿瘤细胞的耐药性。在本论文的第二部分中我们利用P-糖蛋白的作用底物罗丹明123,通过流式细胞仪检测药物处理后的细胞内罗丹明123积累变化,建立了逆转肿瘤细胞多药耐药性药物的筛选模型和方法,可用于评价药物逆转肿瘤细胞多药耐药性的活性。使用流式细胞仪高通量附件,建立高通量药物筛选技术。通过阳性药物,确定了逆转耐药性药物筛选模型的Z’因子为0.88,说明该筛选模型是一种精确度较高、稳定性较好、有效的高通量筛选方法。实验使用由本研究所样品库提供的样品,筛选近8000个化合物,最终获得较好的阳性化合物10个,并对其中2个化合物进行了较深入的研究。在对天然产物IM-10的研究中,我们发现IM-10复合物和IM-12单体增加罗丹明123在HR-20耐药细胞中积累,并且与高三尖杉酯碱合用后具有协同作用,表明IM-10具有逆转多药耐药性作用。在对苦参素的研究中证实,以苦参素为主要成分的复方中药岩舒注射液处理MCF-7/DOX耐药细胞,可以降低P-糖蛋白表达,增加多柔比星在细胞中的积累,与多柔比星合用对耐药细胞有协同作用。