研究背景血管钙化(Vascular calcification,VC)是动脉粥样硬化、高血压、糖尿病以及慢性肾脏病中普遍存在的共同的病理表现。研究表明:动脉钙化会使心血管事件增加4倍,其中以冠状动脉钙化(Coronary artery calcification,CAC)较常见且最为严重。冠脉内的微钙化可能会破坏纤维帽导致斑块破裂,并暴露胶原纤维致使血栓形成,导致急性心肌梗死(AMI)的发生;而中-重度的钙化则会增加球囊扩张血管成形术(PTCA),经皮冠状动脉介入治疗(PCI),甚至冠状动脉旁路移植术(CABG)等的手术并发症。尽管已经投入了大量的医疗费用并进行了广泛的研究工作,但目前仍然难以得出有效的治疗策略。白藜芦醇(Resveratrol,RSV)是天然的多酚类化合物,自1939年首次被发现,白藜芦醇和葡萄酒的抗炎、抗氧化、抑制血小板聚集和血栓形成等多种心血管保护作用已经得到大量研究证实。除此之外,研究还发现白藜芦醇在骨骼系统中对骨形成过程中的相关细胞也起到一定调控作用,可以调节间充质干细胞和成骨细胞分化,抑制破骨细胞形成。同时研究也发现白藜芦醇能够抑制平滑肌细胞增生,但是在骨细胞分化类似的平滑肌细胞钙化过程中,白藜芦醇是否同样影响平滑肌细胞向成骨细胞分化仍无明确定论。第一部分TLR4/NF-kB信号通路在LPS诱导的血管平滑肌细胞炎症和成骨反应中的作用目的研究脂多糖(LPS)对血管平滑肌细胞炎症及成骨反应的影响及其作用机制方法体外培养的人血管平滑肌细胞,用TLR4激活物LPS分别干预0.5-24小时。运用免疫印迹法分析细胞内炎症相关因子ICAM-1、MCP-1、TNF-α及成骨相关因子BMP-2、ALP蛋白表达水平以及核转录因子kB(NF-kB)的活化水平;用ELISA方法分析细胞培养基上清中IL-6、IL-8、TNF-α等炎性因子的释放水平;采用茜素红染色观察钙盐沉积情况。其次,应用NF-kB抑制剂BAY11-7082预处理体外培养的血管平滑肌细胞1h抑制NF-kB活化,再予LPS刺激24小时,分析TLR4介导的炎症因子ICAM-1、MCP-1、TNF-α及成骨相关因子BMP-2、ALP的表达量和IL-6、IL-8、TNF-a等的释放,以及茜素红染色钙盐沉积情况。结果LPS能诱导人血管平滑肌细胞ICAM-1、MCP-1、TNF-α、BMP-2、ALP等蛋白表达,IL-6、IL-8、TNF-a的释放,以及NF-kB信号通路的活化;NF-kB 抑制剂 BAY11-7082 能抑制 LPS 诱导的 ICAM-1、MCP-1、TNF-α、BMP-2、ALP等蛋白表达及IL-6、IL-8、TNF-a等释放,还能抑制钙结节的形成。结论LPS能诱导人血管平滑肌细胞的炎症和成骨反应以及TLR4/NF-kB信号通路的活化。NF-kB信号通路的活化能调控TLR4介导的炎症和成骨反应,TLR4/NF-kB信号通路的活化可能是血管钙化发生发展的重要机制。第二部分白藜芦醇对LPS诱导的血管平滑肌细胞炎症及成骨反应的调节作用及其机制探讨目的探讨白藜芦醇对LPS诱导的平滑肌细胞炎症及成骨反应的调节作用及其机制。方法体外培养人血管平滑肌细胞,先用白藜芦醇预处理1h,再用LPS干预0.5-24 小时。免疫印迹法分析 ICAM-1、MCP-1、TNF-α、BMP-2、ALP 蛋白表达以及细胞内NF-kB活化水平;ELISA方法分析IL-6、IL-8、TNF-a的释放;茜素红行钙结节染色。结果白藜芦醇能抑制TLR4介导的血管平滑肌细胞ICAM-1、MCP-1、TNF-α、BMP-2、ALP等蛋白的表达及IL-6、IL-8、TNF-a的释放,还能抑制TLR4介导的NF-kB的活化。结论白藜芦醇可通过抑制TLR4/NF-kB信号通路抑制LPS诱导的人血管平滑肌细胞的炎症及成骨反应;因此,白藜芦醇可能具有防治血管钙化进展的作用。