黄精对自然衰老大鼠内皮祖细胞功能及端粒酶活性的影响

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目的:  1.观察黄精对自然衰老大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能及端粒酶活性的影响。  2.探讨黄精干预EPCs衰老的可能作用机制。  方法:取健康SPF级SD大鼠60只,其中自然衰老大鼠(20月龄)48只,青年大鼠(5月龄)12只。青年大鼠设为对照组,衰老大鼠按体重随机分为空白组,黄精高、中、低剂量组,每组12只;黄精高、中、低剂量组分别予以4g·kg-1、2g·kg-1、1g·kg-1黄精水煎液灌胃,对照组和空白组予以等量生理盐水灌胃,每日1次,连续12周后取动脉血检测抗氧化力指标,即血清总抗氧化力(total-antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(glutathione-peroxidase,GSH-PX)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。采用密度梯度离心法结合差速贴壁法分离各组大鼠骨髓单个核细胞,用添加多种生长因子的全培养基进行诱导培养,通过细胞形态学观察、特异性结合荆豆凝集素-1(ulex europaeus agglutinin,UEA-1)和乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low density lipoprotein,ac-LDL)的摄取功能来对EPCs进行鉴定。采用四唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖力,迁移小室检测迁移力,体外血管生成试剂盒检测成小管功能,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测端粒酶活性。  结果:  1.与对照组比较,空白组血清T-AOC、SOD、GSH-Px含量明显减少,MDA含量增加(P<0.01);与空白组比较,黄精高、中剂量组血清T-AOC、SOD、GSH-Px含量均有增加,MDA含量减少(P<0.05),而黄精低剂量组血清各指标无明显统计学差异。  2.刚分离的大鼠骨髓单个核细胞呈小圆形,诱导培养第4d可见细胞贴壁生长,以纺锤形细胞为主,培养至第7d可见到明显的细胞集落及线状结构的形成,传代培养至第2-4周细胞呈典型的铺路石样,第4-8周出现生长高峰,呈放射状生长;能吞噬ac-LDL并结合UEA-1。  3.与对照组比较,空白组骨髓EPCs功能受损明显,端粒酶活性降低(P<0.01);与空白组比较,黄精高、中剂量组均可促进EPCs的增殖力、迁移力、成小管力和端粒酶活性(P<0.05),而低剂量组对EPCs功能和端粒酶活性无明显影响。  结论:  1.黄精可提高衰老大鼠体内血清抗氧化水平,有利于改善细胞所处的内环境。  2.黄精可通过提高细胞端粒酶活性来延缓EPCs的衰老,促进衰老EPCs的功能,这有利于增强EPCs对衰老机体血管内皮损伤的更新及修复。
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