DEK蛋白是一种普遍存在的可磷酸化的染色质架构蛋白,主要定位于细胞核的常染色质区域。DEK蛋白有两个功能性的DNA结合域,一个是位于中心的SAP/SAF DNA结合域,另一个是位于羧基端的DNA结合域。羧基端存在多个可磷酸化位点,与DEK蛋白的功能密切相关。很多研究显示,DEK蛋白在DNA复制、损伤修复、基因转录的调控、mRNA的转录后加工以及细胞分化中发挥重要的作用。目前,DEK蛋白已被确认为是癌基因,其与恶性肿瘤的发生发展密切相关。但是,DEK蛋白的作用机理尚有待进一步的研究。我们选用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统进行DEK蛋白的真核表达,在非变性条件下进行蛋白纯化,从而得到具有生物活性的DEK蛋白；并对DEK蛋白的活性进行了检测,以期为进一步阐明DEK蛋白的功能奠定基础。我们以实验室制各的pMD18-T-DEK为模板,对DEK基因进行扩增,并将其插入到杆状病毒Bac-To-Bac表达系统的pFastBacI质粒中,构建了pFastBacI-DEK质粒,转化DH10Bac大肠杆菌后获得重组穿梭载体Bacmid-DEK,用脂质体介导转染Sf9细胞产生具有强感染力的重组杆状病毒AcNPV-DEK。用此重组杆状病毒感染Sf9细胞,分别收集感染24h、48 h和72 h后的Sf9细胞；细胞裂解后,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,可见大小约为50 kD的特异性蛋白条带,表明AcNPV-DEK在Sf9细胞中成功地表达了His-DEK融合蛋白,并且在感染48 h后Sf9细胞中DEK蛋白的表达量最高。在非变性条件下,利用Ni-NTA agarose对表达的His-DEK融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,获得了高纯度的His-DEK融合蛋白。进一步,我们研究了His-DEK融合蛋白与DNA的结合活性。通过凝胶迁移阻滞分析实验(EMSA),我们发现,与原核表达纯化并复性的His-CDB相比,His-DEK具有相类似的特点：都可以与超螺旋型及线性化的DNA结合,但更倾向于与超螺旋型DNA相结合；同时真核表达的His-DEK活性明显要高于原核表达的His-CDB。由于Sf9细胞中表达的DEK蛋白存在过磷酸化修饰,这会大幅降低DEK蛋白与DNA结合的活性,因此,我们选用λ-PPase对His-DEK融合蛋白进行去磷酸化,结果表明去磷酸化的His-DEK融合蛋白与DNA的结合能力增强。综上所述,本研究利用Bac-To-Bac杆状病毒真核表达系统表达并纯化出具有生物学活性的DEK蛋白,并研究了其与DNA的结合活性,为进一步研究其功能奠定了必要的物质基础。