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目的:观察A型肉毒毒素(botulinum toxin type A Bo NT/A)关节腔注射对佐剂性关节炎疼痛大鼠背根神经节(dorsal root ganglion DRG)中瞬态电压感受器阳离子通道1(transient receptor potential vanilloid type 1 TRPV1)表达的影响并且讨论其参与的镇痛机制。方法:SD雄性大鼠162只,按随机数字表法取18只大鼠左后肢踝关节腔注射50μL生理盐水作为Sham组,其余大鼠左后肢踝关节腔注射50μL完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant CFA)建立佐剂性关节炎疼痛模型后按随机数字表法分为CFA组(36只),和Bo NT/A组:1U(36只)、3U(36只)、10U(36只)。建模3周关节炎疼痛模型逐渐稳定后,Sham组和CFA组大鼠关节腔内注射20μL生理盐水,而1U,3U,10U组大鼠关节腔内注射不同剂量20μL的Bo NT/A即:Sham组为对照组+关节腔内注射20μL生理盐水,CFA组为模型组+关节腔内注射20μL生理盐水,1U Bo NT/A组为模型组+关节腔内注射1U的20μLBo NT/A,3U Bo NT/A组为模型组+关节腔内注射3U的20μLBo NT/A,10U Bo NT/A组为模型组+关节腔内注射10U的20μLBo NT/A。分别于造模前1、5天,造模后3、7、14、21天和给药后1、3、5、7、14天对各组大鼠进行机械痛撤足阈值和热痛阈潜伏期测试,红外热成像观察,应用免疫印迹和免疫荧光法观察不同时间点各组大鼠DRG中TRPV1蛋白表达水平和TRPV1/CGRP阳性细胞数百分比变化。给药后观察Bo NT/A的水解产物裂解的突触相关蛋白-25k Da(cleaved synaptosomal-associated protein of 25 k Da cl-SNAP-25)是否可以通过轴浆逆向运输到达DRG,进一步观察其到达DRG后对TRPV1蛋白水平和TRPV1/CGRP阳性细胞数百分比及TRPV1 m RNA水平表达变化的影响,以及HE染色观察关节炎相关组织的病变情况。结果:1,与Sham组相比,造模后CFA组机械痛撤足阈值和热痛阈潜伏期明显降低(P<0.001),TRPV1受体的蛋白表达水平(P<0.001),TRPV1/CGRP阳性细胞数百分比显著上调(P<0.001)和TRPV1 m RNA水平明显升高(P<0.01)。2,与CFA组相比,Bo NT/A组机械痛撤足阈值升高且存在剂量依赖性,3 U组、10 U组给药后3天内大鼠的机械痛撤足阈值开始提高(P<0.01),第5天开始镇痛效果比较显著(P<0.001)一直持续到第14天差异仍有统计学意义(P<0.001),而3 U组和10U组比较组间差异无统计学意义(P>0.05)。与CFA组相比,1U组给药后第14天时才发现有显著镇痛效果(P<0.01)。与CFA组相比,关节腔注射Bo NT/A后,3 U组、10 U组大鼠热痛阈潜伏期显著提高,给药后热痛阈潜伏期3天内开始提高(3U P<0.05;10U:P<0.01),5天后达到高峰(P<0.001)一直持续到第14天(P<0.001),而3 U组和10U组比较,组间热痛阈潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。但是,给药后1U组与CFA组热痛阈潜伏期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3,与Sham组相比,CFA注射后大鼠踝关节体表温度显著升高,从CFA注射第3天开始持续到检测的第35天差异仍非常显著(P<0.001)。与CFA组相比,Bo NT/A注射后(1 U、3 U、10U)组踝关节体表温度显著降低,第5天开始踝关节体表温度显著降低(P<0.05)一直可持续到第14天差异仍非常显著(P<0.05),但是Bo NT/A(1 U、3 U、10U)各剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。4,CFA组生理盐水注射5天、14天踝关节滑膜增生和软骨破坏的情况没有明显改善;与CFA组相比,Bo NT/A注射后(1 U、3 U、10U)组注射5天、14天后踝关节滑膜增生和软骨破坏的情况明显改善。但是,Bo NT/A(1 U、3 U、10U)各剂量组间无明显差异。5,使用免疫荧光方法在Bo NT/A组的DRG中检测到了cl-SNAP-25并且发现TRPV1和cl-SNAP-25双标免疫荧光染色阳性细胞,从而证明关节腔注射Bo NT/A后其可以通过轴浆逆向运输的方式到达DRG中TRPV1阳性细胞中。6,关节腔注射Bo NT/A 5天后,与CFA组相比,Bo NT/A组TRPV1受体的蛋白表达水平和TRPV1/CGRP阳性细胞数百分比显著降低且存在剂量依赖性,但Bo NT/A各组TRPV1 m RNA与CFA组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以上结果说明关节腔注射BoNT/A后不仅可以改善关节软骨破坏和滑膜增生反应,而且可以通过轴浆逆向运输方式到达DRG,并通过抑制DRG中TRPV1的蛋白表达水平显著降低机械触发痛和热痛觉过敏,但是并没有下调TRPV1 m RNA水平。这些研究说明Bo NT/A可能通过抑制TRPV1的细胞膜转运过程而降低TRPV1的蛋白表达水平从而发挥其抗伤害感受器的作用。