论文部分内容阅读
炎症是一种由致病菌、有害刺激或物理损伤引起的适应性反应,是机体对感染或组织损伤所产生的一种有益的防御措施,但异常的炎症反应会促使多种疾病的发生。因此,抑制前炎症介质的生成或阻断其生物学功能有助于更好地预防和治疗疾病。长久以来,科研工作者试图从天然产物中分离提取抗炎有效活性成分,并取得了大量研究成果工作。根据前期研究基础发现桑椹具有较强的抗炎活性,因此,本研究以桑椹果实作为实验材料,筛选其抗炎有效成分,并研究其潜在的抗炎分子机理。首先,利用脂多糖(LPS)作为诱导剂,在RAW264.7小鼠巨噬细胞上建立炎症细胞模型,比较了五种莓果(桑椹、黑莓、红树莓、黑树莓和蓝莓)粗提物的抗炎效果;随后采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导Balb/C小鼠建立急性结肠炎模型,发现了桑椹作为日常饮食补充剂可以预防急性小鼠结肠炎,为更好的研发桑椹制品提供理论依据;其次,为进一步明确桑椹中含有的抗炎成分,本研究比较桑椹的二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(EA)、正丁醇(BA)和水提物(WE)对LPS诱导产生的炎症介质的表达影响,从中筛选出抗炎活性最强的萃取成分;再次,研究筛选出来的活性提取物对LPS诱导引起的p65核转运和NF-?B信号通路的影响,并在小鼠急性结肠炎模型中验证其功效,确定其抗炎分子机制;最后,为了得到活性单体化合物,进一步以桑椹活性提取物作为材料,采用高效液相色谱(HPLC)和柱层析等方法对其进行分离纯化,并对其抗炎效果进行评价。实验结果表明:(1)在五种莓果粗提物的抗炎活性筛选中,桑椹、黑莓和蓝莓具有较强的抗炎活性;(2)在LPS激活的巨噬细胞中,桑椹各提取物中二氯甲烷提取物的抗炎效果最强,不仅能有效抑制i NOS、COX-2的m RNA及蛋白质表达,还能抑制IL-1?和IL-6的m RNA表达;(3)桑椹二氯甲烷提取物能够有效阻断LPS诱导引起的mi R-155、mi R-125a和mi R-146a的上调及mi R-150的下调,还能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;(4)桑椹二氯甲烷提取物可以有效地抑制LPS诱导引起的p65核转运,且是通过抑制NF-?B信号通路中的I?B?的激活,从而抑制下游一系列的炎症反应;(5)桑椹及其二氯甲烷提取物均能够有效的预防DSS诱导的小鼠急性结肠炎;(6)获得的两个抗炎活性单体化合物分别为?-亚麻酸乙酯和亚油酸。本研究成果认为桑椹及桑椹二氯甲烷提取物在体内体外均表现出很好的抗炎活性,能广泛地应用于畜牧业、药品及食品行业,尤其是作为天然功能性保健品,提取出来的活性单体化合物也将为新型抗炎药物的研究开发提供先导化合物。