肌肉生长发育及分化有关的基因主要是作为负向调控因子的肌肉生长抑制素基因(myostatin,MSTN)和作为正向调控因子的生肌调节因子(MRFs)。MSTN基因属于转化生长因子β(TGF—β)超家族,其功能是抑制成肌细胞的过度增殖,是肌肉发育的负调控基因;生肌调节因子家族主要包括Myf5,MyoD,MyoG和MRF4等4个家族成员,其中MyoD基因是脊椎动物肌肉发育的主导调控基因之一,对骨骼肌的形成和分化起主要作用,缺失可导致成肌细胞的增殖和分化无法进行。鱼类应激会影响肌肉生长,为了解应激影响鱼类生长的机理,本文以大鳞副泥鳅为研究对象,分别克隆了大鳞副泥鳅的MSTN基因和MyoD基因的cDNA序列,并对其进行序列分析;运用实时荧光光定量PCR技术分析两个基因的组织表达特异性;检测地塞米松应激处理后的肌肉组织中MSTN和MyoD基因表达的剂量和时间效应。主要研究结果如下:(1)大鳞副泥鳅MSTN基因的cDNA序列长度为1229bp(GeneBank序列号:KY676785),编码375个氨基酸,预测其蛋白质分子量为42072.23Da,理论等电点pI=6.82,其氨基酸序列中存在9个保守的半胱氨酸残基、1个酶切水解位点(RIRR)以及11个磷酸化位点,MSTN基因编码的氨基酸序列与稀有鮈鲫的同源性最高,相似度为96%;MyoD基因的cDNA序列长度为951bp(GeneBank序列号:KY676786),编码274个氨基酸,预测其蛋白质分子量为30549.89,理论等电点pI=5.37,其氨基酸序列具有26个磷酸化位点,MyoD基因编码的氨基酸序列与翘嘴鲌的同源性最高,相似度为92.7%。(2)MSTN和MyoD基因在所检测的7个组织中均有表达,但表达量差异较大。MSTN基因在肌肉的相对表达量最高,在眼和肠道的相对表达量较低,在肝脏、脾脏、鳃和心脏中仅有微量表达;MyoD基因在肌肉的相对表达量最高,在鳃、眼和肠道的相对表达量较低,在心脏、肝脏和脾脏中微量表达。(3)持续注射不同浓度的地塞米松5d后,实验组(60μg/kg,600 μg/kg,1200μg/kg)MSTN和MyoD基因的mRNA表达量均显著低于对照组(0μg/kg)(P<0.05);实验组MSTN基因的mRNA的表达量随地塞米松浓度的增而增加,但600 μg/kg和1200 μg/kg组差异不显著(P>0.05);实验组MyoD基因mRNA的表达量随地塞米松浓度的增均显著减少(P<0.05)。表明大鳞副泥鳅MSTN和MyoD基因的表达受地塞米松浓度影响,具有一定的剂量依赖性。(4)持续注射浓度为600 μg/kg的地塞米松后,MSTN基因的mRNA相对表达量在第6h、12h、5d和10d均显著降低(P<0.05),在第24h显著升高(P<0.05);MyoD基因的mRNA相对表达量在第6h、12h和24h均显著升高(P<0.05),在第5d和10d,MyoD基因的mRNA相对表达量降低,但第5d的差异不显著(P>0.05)。表明大鳞副泥鳅MSTN和MyoD基因的表达量在地塞米松应激处理后具有时间效应,短期应激可以抑制MSTN基因的表达,促进MyoD基因的表达;长期应激使MSTN和MyoD基因的表达均受到抑制。