论文部分内容阅读
【研究背景】特发性矮小(idiopathic short stature，ISS)为目前尚无可认知的原因引起的身材矮小。生长激素／胰岛素样生长因子(growth hormone／insulin-like growth factors，GH／IGFs)轴是促生长发育的重要内分泌轴，因而人们试图从这一轴中的激素、生长因子及信号传递途径着手，探讨特发性矮小的病因，国外有研究表明ISS患儿存在GH部分不敏感，并发现生长激素受体(growth hormone receptor，GHR)基因突变。【目的】观察ISS患儿血中胰岛素样生长因子—1(insulin-like growth factor-1，IGF-Ⅰ)水平及其结合蛋白—3(insulin-like growth factor binding protein-3，IGFBP-3)水平是否是降低的，并通过测定反映GHR水平的血生长激素结合蛋白(growth hormone binding protein，GHBP)来证实血中IGF-Ⅰ水平及IGFBP-3水平降低是否与GHR缺陷导致GH不敏感有关。研究中国湖南汉族人群ISS患儿是否存在GHR基因突变，旨在阐明ISS的病因，为其治疗提供理论依据。并探讨ISS儿童的个性特征及心理行为有无异常，为其防治提供理论依据。【方法】选取37例ISS患儿为病例组，37例年龄性别相匹配的正常儿童为对照组。采用放射免疫分析法(RIA)测定血清GH，采用免疫放射计量法(IRMA)测定血清IGF-Ⅰ及IGFBP-3。采用葡聚糖覆盖炭末吸附法(Dextran-coated charcoal technique，DCT)法检测血清GHBP浓度。PCR扩增GHR基因外显子2～7，PCR—SSCP进行基因突变筛选，异常者行直接测序，或虽然PCR-SSCP检测正常，但矮小较显著的12例ISS患儿行PCR产物直接测序。采用艾森克个性问卷(EPQ)及Achenbach儿童行为量表(CBCL)对32例学龄期ISS男童及32例正常儿童进行测试。【结果】①ISS组血清GHBP、IGF-Ⅰ、IGFBP-3均明显低于正常对照组(P值均小于0.01)，而血清GH基础值在ISS组明显高于对照组(P小于0.05)。②ISS组与对照组血GHBP与年龄、身高、体重、IGF-Ⅰ间均呈显著正相关(ISS组r值依次为0.386，0.485，0.508，0.379，相应P值均小于0.05；对照组r值依次为0.780，0.849，0.833，0.673，相应P值均小于0.001)。③ISS组与对照组血清IGF-Ⅰ与IGFBP-3、年龄、身高、体重间均呈显著正相关(ISS组r值依次为0.863，0.928，0.909，0.887，相应P值均小于0.001；对照组r值依次为0.861，0.788，0.827，0.804，相应P值均小于0.001)。④ISS组与对照组血IGFBP-3与GHBP、年龄、身高、体重间均呈显著正相关(ISS组r值依次为0.423，0.837，0.786，0.670，相应P值均小于0.01；对照组r值依次为0.562，0.660，0.697，0.670，相应P值均小0.001)。⑤除外显子3外，各外显子PCR产物1.5％琼脂糖凝胶电泳均可见清晰、亮度均匀一致的条带，其大小与预期产物扩增片段大小一致。⑥所有患儿PCR—SSCP检测未检测出异常泳带。⑦对矮小较显著的12个ISS患者的外显子2及外显子4～7 PCR产物直接自动测序，发现1例患儿(病例22)外显子2上编码GHR信号肽的第16密码子第1位碱基发生纯合子A—G碱基转换(AGT—GGT)，使信号肽第16位丝氨酸变成甘氨酸(Ser16Gly，S16G)，而在37例正常人中无此改变，不支持多态性改变，可能为新发现的GHR基因点突变。⑧8个病人及一个正常人外显子4上第182位碱基对发生G—A碱基转换导致第43位密码子发生CGA—CAA的改变，使GHR多肽链上第43位精氨酸变成谷氨酰胺(Arg43Gln，R43Q)，且均为杂合子突变，为新发现的GHR基因多态性。⑨5例TSS患者及1例正常对照外显子6第558位碱基对发生A—G碱基转换，致第168密码子第3碱基发生改变，即GGA—GGG，但无氨基酸的改变，为同义突变，即Gly168(G168)，均为纯合子突变，为一已知的多态性。⑩EPQ测试结果显示ISS组E分明显低于对照组(P＜0.01)，N分明显高于对照组(P＜0.01)；Achenbach儿童行为测试显示ISS组活动能力及社交能力均明显低于对照组(P＜0.02及P＜0.01)，但学习情况差异无显著性；行为问题中，除社交退缩、交往不良两组差异有显著性外(P＜0.01)，ISS组无其他行为障碍。【结论】①ISS患儿血中IGF-1和IGFBP-3降低可能是其矮小的原因之一。②ISS患儿，血中反映GHR水平的GHBP降低，而GH基础值升高，提示可能存在因GHR缺陷导致GH不敏感。③发现1例ISS患儿外显子2上编码GHR信号肽的第16密码子第1位碱基发生纯合子A—G碱基转换，使信号肽第16位丝氨酸变成甘氨酸(Ser16Gly，S16G)，这一改变可能为新发现的点突变。④发现GHR基因外显子4上第182位碱基对发生杂合子G—A碱基转换导致GHR多肽链上第43位精氨酸变成谷氨酰胺(Arg43Gln，R43Q)，为新发现的GHR基因多态性。⑤学龄期ISS男孩性格偏内向、情绪较不稳定，存在交往不良、社交退缩现象，活动能力和社交能力降低。