随着人工授精技术在养猪行业的普及推广,精液保存技术也备受关注,精液的保存质量直接影响着人工授精的成功率与母畜受胎率和产仔率。精液稀释剂起到了保护精子的作用,稀释剂的成分可以保持精子活力,保证精子顶体和质膜的完整性。但目前市场上的精液稀释剂的成分比较复杂,而且保存时间不长,效果不稳定。为了研发出高效且保存效果稳定的稀释剂配方,本研究设计了六种新的猪精液稀释剂酉配方,分别是以Modena稀释液为基础的改版Modena稀释液—A配方,以抗氧化作用为特点的B配方,以添加高分子添加剂为特点的C配方,以采用非厌氧酵解底物的糖源为特点的D配方,以提高运动性为主的E配方,以及以减缓精子沉降速度为特点的F配方。以经典的猪精液稀释剂配方(Modena稀释液)和市场同类产品Cont为对照,通过比较测定精子活力、质膜完整率、精子畸形率及体外受精卵裂率和囊胚率等指标,验证了各配方在常温及低温状态下的精子保存效果,并对筛选出的最优稀释液配方进行了进一步优化,初步研发成功了一种效果优良的猪精液保存剂配方,为研发高效的公猪精液稀释剂产品打下了基础。以下为本研究的主要结果:1.精液常温保存条件下稀释液配方的筛选:对利用各配方常温条件下保存的精子活力、质膜完整率和精子畸形率等进行测定,结果显示:D配方的保存效果最佳,C配方的保存效果次之,在保存到第7d后两者的保存效果才存在显著差异(P<0.05)。D配方保存到第9d精子活力仍可达0.5以上,质膜完整率和精子畸形率分别为41%和74.4%。C配方保存到第8d精子活力在0.5以上,质膜完整率和精子畸形率分别为33.6%和69%。A配方的保存效果虽然低于C配方和D配方,但在保存到第7d活力仍然在0.5以上,质膜完整率和精子畸形率分别为25.3%和54.5%。E配方的保存效果低于A配方,在保存第7d时精子活力为0.52,B配方和F配方的保存效果显著低于其他配方(P<0.05),再保存第4d时精子活力为0.49和 0.52。2.精液低温保存条件下稀释液配方的筛选:D配方的保存效果最佳,C配方的保存效果次之,且在保存的1～6d,两组配方的保存效果不存在显著差异(P>0.05)。D配方保存到第7d精子活力仍可达0.5以上,质膜完整率和精子畸形率分别为46.4%和78.2%。C配方保存到第6d精子活力在0.6以上,质膜完整率和精子畸形率分别为41.6%和76.4%。A配方的保存效果虽然低于C配方和D配方,但在保存到第6d活力仍然在0.5以上,质膜完整率和精子畸形率分别为34.4%和69.6%。E配方在保存第4d时精子活力为0.52,B配方和F配方的保存效果显著低于其他配方(P<0.05),保存第4d时精子活力分别为0.43和0.53。3.配方优化试验:在通过六种配方比较筛选出其中最佳的C配方和D配方的基础上,进一步调整优化了两种配方的成分配比,设计出两种新配方T1、T2,并与D配方和市场在售的Cont配方进行了对比,结果显示:T1配方和T2配方的保存效果比D配方和Cont配方的保存效果好,T2配方的效果好于T1配方,D配方的保存效果高于Cont配方。在保存的1～3d,T1配方和T2配方的精子活力、质膜完整率和精子畸形率都不存在显著差异(P>0.05),仅在第4d和第5d时T2配方的精子活力显著高于T1配方(P<0.05),T2组的精子活力、质膜完整率和精子畸形率与Cont配方间差异显著(P<0.05)。4.优化配方保存精液的体外受精效果验证:通过对比T2配方与Cont配方、Modena保存到第5d的精液进行体外受精后受精卵的分裂率可以看出,T2配方保存的精液质量优于其他两个配方。5.摇匀频率对精液常温保存效果的影响:稀释精液保存期间实施不同时间间隔的摇匀操作,比较测定不同摇匀次数的精子活力、质膜完整率、精子畸形率等指标,结果显示,利用C配方保存的精液每隔12h、1d、2d摇匀一次的实验组之间,精子活力、质膜完整率和精子畸形率均不存在显著差异(P<0.05),而Modena基础液和Cont配方的每隔12h、1d、2d、3d摇匀一次的实验组的精子活力、质膜完整率和精子畸形率等均依次显著降低(P<0.05)。表明添加了高分子X的C配方可以减少摇匀频率,使稀释保存精液的管理省时省力。