【摘 要】
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目的:研究黄芩素（Baicalein,BE）对烟曲霉菌（A.fumigatus）角膜炎的抗真菌和抑炎作用及其潜在机制。方法:1.采用CCK8、细胞划痕实验、最小抑菌浓度、体内Draize试验,测定Baicalein的体内体外毒性。2.采用生物膜形成、扫描电子显微镜、碘化丙啶摄取试验、菌丝荧光白染色和体外粘附试验用以评估Baicalein的抗真菌作用。3.在真菌性角膜炎（FK）小鼠模型中,使用临床评
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目的:研究黄芩素（Baicalein,BE）对烟曲霉菌（A.fumigatus）角膜炎的抗真菌和抑炎作用及其潜在机制。方法:1.采用CCK8、细胞划痕实验、最小抑菌浓度、体内Draize试验,测定Baicalein的体内体外毒性。2.采用生物膜形成、扫描电子显微镜、碘化丙啶摄取试验、菌丝荧光白染色和体外粘附试验用以评估Baicalein的抗真菌作用。3.在真菌性角膜炎（FK）小鼠模型中,使用临床评分和平板计数来评估FK严重程度。采用髓过氧化物酶测定和免疫荧光染色以检查中性粒细胞的浸润和活性。采用PCR,ELISA,Western blot检测感染的C57BL/6小鼠角膜中胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP）,胸腺基质淋巴细胞生成素受体（Thymic Stromal Lymphopoietin Receptor,TSLPR）和炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达情况,以分析Baicalein的抗炎。4.人角膜上皮细胞（HCECs）先用菌丝刺激细胞1小时,再用0.25m M Baicalein或DMSO处理3小时或23小时,采用PCR,ELISA或Western blot检测各组细胞中TSLP及炎症因子的表达变化,并通过细胞免疫荧光实验检测HCEC中TSLP的分泌情况。5.通过使用人类重组蛋白TSLP（rTSLP）和TSLP小干扰RNA（TSLP si RNA）分别预处理HCEC 12小时和48小时,再用菌丝刺激1小时,随后用Baicalein处理3小时或23小时,采用PCR,ELISA或Western blot检测各组细胞中TSLP及炎症因子的表达变化。评估Baicalein和TSLP在真菌性角膜炎中的作用,用以探索Baicalein的抗炎活性以及体内和体外的潜在机制。结果:1.0.25m M的Baicalein（无体内体外毒性）显著抑制了烟曲霉的生长,菌丝、生物膜形成和对角膜上皮细胞的粘附。2.在患有烟曲霉性角膜炎的小鼠中,与DMSO对照组相比,给予小鼠角膜0.25m M Baicalein处理后,烟曲霉菌感染第1天、3天、5天的小鼠角膜炎症反应减轻,临床评分显著降低;感染第3天时,Baicalein处理组角膜基质层及上皮细胞层中性粒细胞的数量明显减少;感染第5天时,Baicalein处理组角膜菌落计数显著降低;3.与DMSO对照组相比,Baicalein处理组在感染1天,3天,5天的角膜中TSLP和TSLR,IL-1β,IL-6和TNF-α的m RNA水平下降,感染3天,5天的角膜TSLP,TSLPR,IL-1β,IL-6和TNF-α蛋白的表达下降。4.Baicalein可以显著抑制HCEC在A.fumigatus刺激后引起的IL-1β,IL-6和TNF-αm RNA和蛋白的表达。5.HCEC在A.fumigatus刺激后TSLP表达升高,Baicalein通过抑制TSLP m RNA和蛋白的表达抑制HCEC中TSLP的分泌。6.在HCEC中,TSLP si RNA治疗组的TSLP,IL-1β,IL-6和TNF-α的m RNA和蛋白水平显着降低,而rTSLP治疗组则更高。Baicalein处理可明显抑制rTSLP诱导TSLP,IL-1β,IL-6和TNF-α的表达。结论:Baicalein通过抑制真菌生长,生物膜形成和粘附以及通过下调TSLP/TSLPR信号通路抑制炎症反应而在小鼠烟曲霉性角膜炎中起保护作用。
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