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种子细胞的培养是组织工程的基本要素,细胞有多种来源,主要来源于自体、同种异体、异种组织细胞等。每一种细胞来源都有其优缺点。自体组织细胞应为首选。其中骨髓基质干细胞是一研究热点,组织工程修复大块组织缺损需要高浓度、大量的细胞接种,自体组织细胞存在着数量上的局限性及长期传代后细胞功能老化的问题。因此,有必要寻求组织工程种子细胞新的来源。 目的:观察胎盘基质干细胞(HPMSCs)的形态、生长情况及某些细胞生物学特征以及生物反应器对其扩增的作用。了解HPMSC体外、体内成骨能力及生物反应器构建组织工程骨的效果。建立从胎盘组织中分离、提取、纯化骨组织工程种子细胞的方法,探索种子细胞新的来源,为HPMSCs在骨组织工程研究中的进一步应用提供实验依据。 方法:①.采用含有0.1%胶原酶Ⅳ,0.1%透明质酸酶,0.01%DNaseI的DMEM对剪碎的胎盘小叶进行消化,1.073g/ml Percoll梯度离心等方法进行HPMSCs的分离、提取、纯化。参照培养BMSCs的方法对细胞进行培养。②流式细胞仪分析HPMSC细胞表面抗原分子鉴定。③流式细胞仪分析细胞周期④对HPMSCs进行脂肪诱导分化和骨诱分化实验。将PHMSCs在骨