奶牛乳腺炎是外界病原菌入侵引起的奶牛乳腺组织炎症反应,给奶牛生产养殖造成了重大经济损失,因此探寻防治乳腺炎的新方法已成为研究的热点。雷帕霉素是一种具有抗炎功能的药物,目前主要被用作免疫抑制剂和自噬激活剂,其在奶牛乳腺炎防治中的抗炎效果及作用机制值得深入探究。本文以奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）为研究对象,探究了雷帕霉素在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应中的调控作用及机制,预测其作为奶牛乳腺炎治疗药物的效果,以期为乳腺炎的防控提供新的策略和思路。1 LPS引起奶牛乳腺上皮细胞炎症反应实验以MAC-T细胞为研究对象,使用不同浓度的LPS（0、0.1、1、10和100μg/mL）分别处理6、12和24h。处理结束后,采用ELISA法检测其炎症因子变化情况,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光检测炎症信号通路激活情况,以确定LPS刺激MAC-T细胞建立炎症模型的处理时间和浓度;之后使用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,并用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3表达水平。结果显示:100 μg/mL的LPS处理细胞24 h,可以引起细胞炎症因子分泌显著增多,并能激活炎症信号通路NF-κB;但该条件下LPS的刺激不会对细胞的增殖、凋亡和自噬产生影响。结果提示浓度为100μg/mL的LPS处理24 h可以作为后续诱导MAC-T细胞炎症反应的条件。2雷帕霉素引起炎症状态下奶牛乳腺上皮细胞的自噬为探究雷帕霉素对炎症状态下MAC-T细胞自噬的影响,实验使用不同浓度雷帕霉素（0、10、50和100mM）处理细胞24h。处理结束后,采用ELISA法检测其炎症因子变化情况,CCK-8法检测其细胞增殖情况,以确定雷帕霉素处理细胞的适宜浓度;采用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3表达水平,确定该条件下雷帕霉素可以引起细胞自噬;然后使用雷帕霉素处理炎症状态下的MAC-T细胞,利用Western blot和免疫荧光法检测自噬相关蛋白变化情况。结果表明:使用浓度为10mM的雷帕霉素处理正常和炎症状态下的MAC-T细胞,可以提高LC3-Ⅱ的转化率,并抑制细胞增殖。结果提示浓度为10 mM的雷帕霉素处理MAC-T细胞可引起自噬,但不会影响炎症模型的建立,可以作为后续实验处理的条件。3雷帕霉素引起的自噬对奶牛乳腺上皮细胞炎症的保护作用及其机制为探究雷帕霉素引起的自噬对奶牛乳腺上皮细胞炎症的保护作用,实验使用雷帕霉素处理炎症状态下MAC-T细胞。采用ELISA法检测细胞炎症因子变化,同时利用Western blot和免疫荧光法检测其炎症信号通路核因子-κB（Nuclear factor Kappa B,NF-κB）和丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases,MAPKs）的变化情况。结果显示:雷帕霉素的使用可以显著降低细胞因LPS刺激产生的炎症因子,使NF-κBp65蛋白的磷酸化水平降低、核转位减少,MAPKs的关键蛋白JNK、p38 MAPK磷酸化水平降低。结果提示使用雷帕霉素处理LPS刺激产生炎症的MAC-T细胞,可以抑制细胞NF-κB和MAPKs信号通路的激活并改善炎症反应。综上所述,雷帕霉素引起的自噬可能是通过抑制NF-κB和MAPKs两条炎症信号通路的激活,减少LPS刺激引起的炎症因子分泌而改善细胞炎症状态。本研究证实雷帕霉素可以对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症产生保护作用。