奶及奶产品属于动物源食品,营养丰富,不仅能促进婴幼儿骨骼发育还能防止中、老年人骨质疏松。近几十年来,中国乳制品行业的快速发展使其迅速成为了我国农业的一个非常重要的部分。虽然我国奶业发展迅速,但是随之而来的是奶及奶制品质量安全问题。为了保证我国奶业持续发展,必须加强我国奶及奶制品质量监督检测工作,为此应加强奶及奶产品潜在风险因子的检测方法研究。本文建立了两种牛奶风险因子的检测方法,一种是通过超高效液相色谱同时检测牛奶中苯甲酸和山梨酸的方法,另一种是通过超高效液相色谱串联质谱法检测重组牛生长激素。本文还对上述两种检测方法进行了优化和方法学验证。此外,本文抽取了全国大部分地区的市售商品乳200余批次,对其中苯甲酸和山梨酸的含量进行了检测评估,并对其不同类型商品乳和国内外商品乳中苯甲酸和山梨酸检出率和超标率分别进行了对比。主要研究内容及结论如下:1.建立了超高效液相色谱同时检测牛奶中苯甲酸和山梨酸的方法,优化了柱温、流速、流动相比例等液相色谱条件。对建立的方法进行了方法学验证,验证结果表明,本试验方法检出限为0.01μg/m L,定量限为0.03μg/m L。对不同浓度的加标样品做了检测,回收率在95.3%~107.3%范围内,相对标准偏差在0.9%~10.5%范围内。上述结果表明该方法可有效检测牛奶中苯甲酸和山梨酸。2.对我国市售商品乳中苯甲酸和山梨酸的含量进行了抽样检测分析,抽取地区包括我国北部黑龙江、吉林、内蒙古、辽宁、河南、河北、陕西、山西、山东、宁夏等十省以及北京和天津,我国南部的广东、江苏、浙江、湖北、湖南、云南、江西、广东、福建共九个省份以及上海和重庆,总共抽取202批次牛奶样品。利用第2章中建立的超高效液相色谱法对样品中苯甲酸和山梨酸进行了测定。结果表明,苯甲酸与山梨酸总的检出率分别为9.9%和0.5%。超高温灭菌乳中苯甲酸检出率为8.13%,巴氏杀菌乳中苯甲酸检出率为16.66%。超高温灭菌乳中未检出含有山梨酸,巴氏杀菌乳中山梨酸检出率为2.38%。另外,对不同类型牛奶和国内外牛奶中苯甲酸和山梨酸检出率分别进行卡方分析,结果表明超高温灭菌乳和巴氏杀菌乳中苯甲酸和山梨酸的检出率均无显著差异。国产奶和进口奶中苯甲酸检出率卡方分析中p=0.029<0.05,表明存在显著差异,国产奶和进口奶中山梨酸检出率无显著差异。在考虑到牛奶中苯甲酸本底值小于6 mg/L的情况下,以6 mg/L为分界线,分析苯甲酸超标率,并对不同类型牛奶和国内外牛奶超标率进行卡方分析,结果表明,超高温灭菌乳和巴氏杀菌乳超标率卡方分析的p=0.294>0.05,表明超高温灭菌乳和巴氏杀菌乳中苯甲酸超标率无显著差异。国内外商品乳中苯甲酸超标率卡方分析结果中p=0.480>0.05,这表明国内外商品乳中苯甲酸超标率无显著差异。3.建立了超高效液相色谱串联质谱法检测牛奶中重组牛生长激素的方法,并对其前处理方法进行了系统优化,建立了二次回归模型,该模型极度显著(p<0.01),失拟项p=0.0880>0.05,表明失拟项不显著;决定系数R2=0.9040,说明该二次响应面模型拟合程度良好,试验误差小,最终的模型很适合模拟本试验前处理条件的优化。该模型优化得到的最佳前处理参数如下:酶解时间为155.81 min,DTT反应时间为46.31 min,酶与底物的比例1:59.56,综合考虑将最佳条件定为酶解时间为156 min,DTT反应温度为46 min,酶与底物的比例为1:60,此时重组牛生长激素特意肽段峰面积预测值为20290.9。在上述最优条件下进行3次验证试验(n=3),检测出重组牛生长激素特意肽段峰面积为20394.67,相对标准偏差为2.14%,说明本文建立的模型能真实地反映酶解时间、DTT反应时间和酶与底物的比例对前处理效果的影响。此外,本文还对建立的方法进行了方法学验证,试验结果表明该检测方法检出限和定量限分别为0.71 ng/m L和2.38 ng/m L。加标回收率试验结果表明回收率在92.56%~100.35%范围内,相对标准偏差小于10%。